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研究生6969金蟲 (小有名氣)
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[求助]
求細菌檢測方法? 已有2人參與
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| 我在做真菌發(fā)酵實驗,以后準(zhǔn)備產(chǎn)業(yè)化,但是經(jīng)常會被細菌感染,從而造成損失,請問有什么方法或儀器可以快速檢測細菌感染? |

鐵蟲 (小有名氣)
捐助貴賓 (著名寫手)
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最快的方法就是用顯微鏡觀察,觀察方法如下: 1. 如果您是真菌的液體發(fā)酵,取一點發(fā)酵液直接制備成水浸片(要用載玻片),蓋上蓋玻片后于顯微鏡下觀察,此時由于水浸片沒有染色,視野的光線應(yīng)該調(diào)節(jié)暗一些,并且要注意用油鏡觀察時,水浸片的水不能進入香柏油中(要看清楚細菌的形態(tài),一般需要用油鏡,因此需要用香柏油)。如果真菌是霉菌,呈菌絲狀,與細菌的常見形態(tài):球形、桿形、螺旋形(比較少)很好區(qū)分。如果真菌是酵母菌,就一般有出芽生殖,而且比細菌大(因為真菌是真核微生物),細菌是原核微生物,雖然細菌與酵母菌的相似點是都是單細胞,但是細菌小很多,通常在40倍的高倍鏡下看不清形態(tài),但可以在40倍的高倍鏡下看清酵母菌形態(tài),并且細菌是裂殖(即二分分裂), 與酵母菌的出芽生殖很好區(qū)分。也可以用0.2%美蘭染色溶液加入發(fā)酵液(1:1)中制成染液浸片后顯微鏡觀察,更容易鑒別。(液體發(fā)酵物,浸片觀察法) 2. 如果是真菌的液體發(fā)酵,也可取一點發(fā)酵液在干凈載玻片上制成染涂片后,用細菌的單染色法(最快、最簡單的細菌形態(tài)染色觀察方法),涂片干燥后于顯微鏡下觀察,要看清楚細菌的形態(tài),也一般需要用油鏡。在顯微鏡下的鑒別方法同步驟1所述。要注意固體發(fā)酵后期,如果是霉菌,可能孢子比較多,但是一種霉菌的孢子,形態(tài)比較固定,也容易與污染的細菌區(qū)別。(液體發(fā)酵物,涂片觀察法) 3.如果是真菌的固體發(fā)酵,取一點發(fā)酵物(有培養(yǎng)基、菌體),置于少量無菌生理鹽水(0.85%氯化鈉溶液)或無菌蒸餾水中,再按照上述1或/和2的方法鏡檢即可。 。(固體發(fā)酵物,浸片或涂片觀察法) 4. 上述三種方法都是直接用顯微鏡觀察,沒有培養(yǎng),因為您要的是最快的方法。如果有時間,想更清楚地查明是什么類型的細菌,可以用活菌檢查法:就是取一定體積發(fā)酵液或一定重量固體發(fā)酵物用一定體積無菌生理鹽水按照十倍稀釋法稀釋后,接種到培養(yǎng)細菌的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基平板上,一般培養(yǎng)24小時可見菌落在平板上生長(具體長出時間也隨污染細菌的生長速度而定)。再挑取不同的單菌落按照步驟1、或1、或2的方法鏡檢,這樣您至少可以培養(yǎng)處污染細菌,做仔細研究,但耗時間長。(液體或固體發(fā)酵物,活菌培養(yǎng)+制片觀察法) 5. 建個議: 下次提問最好寫明什么類型發(fā)酵,什么形態(tài)真菌,以便應(yīng)助者少寫些字,同時也使建議更有針對性。 |

捐助貴賓 (著名寫手)
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不好意思,剛才沒有編輯好,按錯了鍵,結(jié)果就發(fā)帖了。請以此帖子為準(zhǔn)。 一、最快的方法就是用顯微鏡觀察,觀察方法如下: 1. 如果您是真菌的液體發(fā)酵,取一點發(fā)酵液直接制備成水浸片(要用載玻片),蓋上蓋玻片后于顯微鏡下觀察,此時由于水浸片沒有染色,視野的光線應(yīng)該調(diào)節(jié)暗一些,并且要注意用油鏡觀察時,水浸片的水不能進入香柏油中(要看清楚細菌的形態(tài),一般需要用油鏡,因此需要用香柏油)。如果真菌是霉菌,呈菌絲狀,與細菌的常見形態(tài):球形、桿形、螺旋形(比較少)很好區(qū)分。如果真菌是酵母菌,就一般有出芽生殖,而且比細菌大,因為真菌是真核微生物,細菌是原核微生物。即: 雖然細菌與酵母菌的相似點是都是單細胞,但是細菌小很多,通常在40倍的高倍鏡下看不清形態(tài),但可以在40倍的高倍鏡下看清酵母菌形態(tài),并且細菌是裂殖(即二分分裂), 與酵母菌的出芽生殖很好區(qū)分。也可以用0.2%美蘭染色溶液加入發(fā)酵液(1:1)中制成染液浸片后顯微鏡觀察,更容易鑒別。(液體發(fā)酵物,浸片觀察法) 2. 如果是真菌的液體發(fā)酵,也可取一點發(fā)酵液在干凈載玻片上制成涂片后,用細菌的簡單染色法(最快、最簡單的細菌形態(tài)染色觀察方法),涂片干燥后于顯微鏡下觀察。要看清楚細菌的形態(tài),也一般需要用油鏡觀察。在顯微鏡下的鑒別方法同步驟1所述。(液體發(fā)酵物,涂片觀察法) 3.如果是真菌的固體發(fā)酵,取一點發(fā)酵物(有培養(yǎng)基、菌體),置于少量無菌生理鹽水(0.85%氯化鈉溶液)或無菌蒸餾水中,再按照上述1或/和2的方法鏡檢即可。要注意固體發(fā)酵后期,如果是霉菌,可能孢子比較多,但是一種霉菌的孢子,形態(tài)比較固定,也容易與污染的細菌區(qū)別。(固體發(fā)酵物,浸片或涂片觀察法) 二、上述三種方法都是直接用顯微鏡觀察,沒有培養(yǎng),因為您要的是最快的方法。如果有時間,想更清楚地查明是什么類型的細菌,可以用活菌檢查法:就是取一定體積發(fā)酵液或一定重量固體發(fā)酵物用一定體積無菌生理鹽水按照十倍稀釋法稀釋后,接種到培養(yǎng)細菌的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基平板上,一般培養(yǎng)24小時可見菌落在平板上生長(具體長出時間也隨污染細菌的生長速度而定)。再挑取不同的單菌落按照步驟1、或2、或3的方法鏡檢,這樣您至少可以培養(yǎng)出污染細菌,確切看到污染細菌的菌落,還可以進行準(zhǔn)確鑒別,但耗時間長。(液體或固體發(fā)酵物,活菌培養(yǎng)+制片觀察法) 5. 建個議: 下次提問請最好寫明什么類型發(fā)酵,什么形態(tài)真菌,以便應(yīng)助者少寫些字,同時也使建議更有針對性。 |

金蟲 (小有名氣)

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