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Probiotics木蟲 (正式寫手)
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Caco-2細胞6孔板培養(yǎng)脫落？ 已有3人參與
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Caco-2細胞為貼壁細胞，用細胞培養(yǎng)瓶培養(yǎng)時一切正常，當傳代到6孔培養(yǎng)板上培養(yǎng)時，正常換液，從傳代開始算長滿這個培養(yǎng)孔大概4天時間，之后再培養(yǎng)2天就有培養(yǎng)孔內細胞脫落現象，時間越長越明顯，期間一直在正常換培養(yǎng)液，前期2天一換，后期1天1換液，還是脫落明顯，肉眼看到脫落之后，用顯微鏡觀察，發(fā)現脫落的位置及其周圍的細胞，都是一些細胞碎片，不是完整的細胞。這是什么原因？之前每次換液也是顯微鏡觀察，沒有任何異常。 困惑了我很久了，之前以為培養(yǎng)液加的少，現在每個孔加3mL 、4mL也是會出現同樣脫落的情況。 煩請高人指點！！ |
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2樓2014-01-08 00:10:07
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5樓2014-05-23 12:15:43
【答案】應助回帖
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我認為消化環(huán)節(jié)是Caco-2模型成功的最關鍵因素之一，既要充分又不能過分。在細胞融合度大于95%時進行消化，首先用PBS洗滌一下，吸干再加5mLPBS，放進培養(yǎng)箱孵育5min，盡量去除培養(yǎng)基；吸干加入胰酶消化5min以上，呈細沙狀時，加入4倍以上胰酶體積的培養(yǎng)基，用5mL槍使勁吹打(壯男15下，弱女子吹打20下以上)，計數時觀察細胞，應該都是單個散在的。如果有2個或以上細胞成團，說明吹打不夠；如果細胞大小不一，可能吹打過了。 以250000個細胞/ml的密度接種transwell，隔天換液即可。 如果有成團的細胞，在transwell的局部這部分細胞擠壓像上突破，最后鼓起成泡，細胞層破裂后，成了一個洞，電阻就再也上不去了。 |
6樓2014-06-05 10:25:14
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