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Probiotics木蟲 (正式寫手)
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[求助]
Caco-2細(xì)胞6孔板培養(yǎng)脫落？ 已有3人參與
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Caco-2細(xì)胞為貼壁細(xì)胞，用細(xì)胞培養(yǎng)瓶培養(yǎng)時(shí)一切正常，當(dāng)傳代到6孔培養(yǎng)板上培養(yǎng)時(shí)，正常換液，從傳代開始算長(zhǎng)滿這個(gè)培養(yǎng)孔大概4天時(shí)間，之后再培養(yǎng)2天就有培養(yǎng)孔內(nèi)細(xì)胞脫落現(xiàn)象，時(shí)間越長(zhǎng)越明顯，期間一直在正常換培養(yǎng)液，前期2天一換，后期1天1換液，還是脫落明顯，肉眼看到脫落之后，用顯微鏡觀察，發(fā)現(xiàn)脫落的位置及其周圍的細(xì)胞，都是一些細(xì)胞碎片，不是完整的細(xì)胞。這是什么原因？之前每次換液也是顯微鏡觀察，沒有任何異常。 困惑了我很久了，之前以為培養(yǎng)液加的少，現(xiàn)在每個(gè)孔加3mL 、4mL也是會(huì)出現(xiàn)同樣脫落的情況。 煩請(qǐng)高人指點(diǎn)��！ |
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各位老師好，我的一志愿為北京科技大學(xué)085601材料專碩
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Probiotics
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2樓2014-01-08 00:10:07
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5樓2014-05-23 12:15:43
【答案】應(yīng)助回帖
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我認(rèn)為消化環(huán)節(jié)是Caco-2模型成功的最關(guān)鍵因素之一，既要充分又不能過分。在細(xì)胞融合度大于95%時(shí)進(jìn)行消化，首先用PBS洗滌一下，吸干再加5mLPBS，放進(jìn)培養(yǎng)箱孵育5min，盡量去除培養(yǎng)基；吸干加入胰酶消化5min以上，呈細(xì)沙狀時(shí)，加入4倍以上胰酶體積的培養(yǎng)基，用5mL槍使勁吹打(壯男15下，弱女子吹打20下以上)，計(jì)數(shù)時(shí)觀察細(xì)胞，應(yīng)該都是單個(gè)散在的。如果有2個(gè)或以上細(xì)胞成團(tuán)，說明吹打不夠；如果細(xì)胞大小不一，可能吹打過了。 以250000個(gè)細(xì)胞/ml的密度接種transwell，隔天換液即可。 如果有成團(tuán)的細(xì)胞，在transwell的局部這部分細(xì)胞擠壓像上突破，最后鼓起成泡，細(xì)胞層破裂后，成了一個(gè)洞，電阻就再也上不去了。 |
6樓2014-06-05 10:25:14
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