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求助 細(xì)胞流式檢測循環(huán)腫瘤細(xì)胞方法 已有1人參與
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| 求助 我想請教 細(xì)胞流式檢測循環(huán)腫瘤細(xì)胞具體實(shí)驗(yàn)方法步驟，提供一下相關(guān)這方面的文獻(xiàn)也好，謝謝。 |
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wotaoyan
新蟲 (初入文壇)
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- 注冊: 2017-11-01
- 專業(yè): 抗腫瘤藥物藥理
【答案】應(yīng)助回帖
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從文獻(xiàn)中復(fù)制的，希望對你有幫助，參考文獻(xiàn)：Cetuximab combined with natural killer cells therapy: an alternative to chemoradiotherapy for patients with advanced non-small cell lung cancer (NSCLC)，Am J Cancer Res 2018;8(5):879-891 Peripheral blood (7 mL) was obtained from patients on day 1 and day 90 for the detection of CTC levels. MNCs from peripheral blood were separated using LymphoprepTM (Haoyang Biologicals) density gradient centrifugation from buffy coats and were washed twice with sterile Hank’s balanced salt solution (Life Technologies, Carlsbad, CA, USA). Isolated cells were enriched via binding to magnetic CD326 (EpCAM) MicroBeads (Miltenyi Biotech, Bergisch Gladbach, Germany) using magnetic activated cell sorting. Then, enriched isolated cells were labelled with monoclonal antibodies targeting the epithelial cell antigens CD45, CD326 as well as cytokeratins 8, 18 and 19 (Miltenyi Biotech) and incubated in the dark for 12 min at room temperature. The monoclonal antibodies (10 μL) anti-CD45-PE, Ep-CAM-APC,and cytokeratins 8, 18, and 19-FITC were added per 7.5 mL of whole blood. Cell pellets were resuspended in 500 μL PBS and enumerated by a FACSCantoTM II (Becton Dickinson, Franklin Lakes, NJ, USA) flow cytometer with a CD45-/CK+/CD326+ gating strategy. The absolute number of CD45-, CK+, and CD326+ cells on FACSCantoTM II was used to measure CTC levels 。 |
2樓2020-03-29 15:56:10
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