 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 查看: 3043 | 回復: 10 | ||
[求助]
質粒構建出了奇怪的現象，實在找不到原因，請大家?guī)兔纯? 已有2人參與
|
||
|
大家好！ 我現在在做Plk0.1-EGF載體重組質粒的構建。有幾個問題始終解決不了，找不到原因。 我是載體和目的基因（大小80bp）用EcoRI 和AgeI 37℃過夜雙酶切后，跑電泳，膠回收，然后用T4連接。連接產物轉化Stbl3感受態(tài). 做了連接的負對照，負對照長了四五個菌落，連接產物大概長十幾個菌落，但挑菌抽質粒跑膠后，發(fā)現抽出來的質粒比空載體小很多（估計2K左右）。這是什么原因呢？操作什么的應該都沒有問題。另外，我們目前用的這個載體是前人改造過的，EcoRI 和AgeI酶切位點之間只有幾十bp大小的序列。 我看到 shRNA載體質粒plko.1 mannual，上面說用EcoR I 和Age I分別酶切。并且Age I是先切的，這是為什么，一定要按這順序切嗎？不可以一起雙切嗎？ [ Last edited by sr_913 on 2014-1-14 at 12:54 ] |
回復此樓» 猜你喜歡
不合理蛙科研實驗中的趣事：實驗器材的 “烏龍”
已經有0人回復
-
不合理蛙科研實驗中的趣事：和實驗材料的 “斗智斗勇”
已經有0人回復
-
化學工程及工業(yè)化學論文潤色/翻譯怎么收費?
已經有95人回復
-
蛋白質檢測：精準分析，解鎖生物分子的密碼
已經有0人回復
-
不合理蛙科研實驗之小鼠實驗：嚴謹設計，解析生命機制的重要載體
已經有0人回復
-
不合理蛙科研實驗之重金屬檢測：精準篩查，守護健康與環(huán)境的防線
已經有0人回復
-
不合理蛙科研實驗之“蛙測重金屬我背鍋三千”
已經有0人回復
-
不合理蛙科研實驗之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經有0人回復
-
納米粒度分析
已經有3人回復
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標南京
已經有0人回復
» 本主題相關價值貼推薦，對您同樣有幫助:
- 連接轉化假陽性提不出來質粒嗎？
已經有8人回復
- 有重組質粒，如何獲得其載體？
已經有6人回復
- 十萬火急，重組質粒酶切只有一條帶，測序有結果，但反復說我質粒濃度很低
已經有16人回復
- 【求助/交流】求助PCR-Targeting抗性基因質粒
已經有5人回復
gongeleven
鐵桿木蟲 (正式寫手)
- 應助: 55 (初中生)
- 金幣: 7107.8
- 散金: 222
- 紅花: 3
- 帖子: 432
- 在線: 152.9小時
- 蟲號: 1082982
- 注冊: 2010-08-27
- 性別: GG
- 專業(yè): 生物物理、生物化學與分子
3樓2014-01-14 15:47:41
lvbobo823
鐵桿木蟲 (正式寫手)
- 應助: 363 (碩士)
- 金幣: 7753.3
- 散金: 15
- 紅花: 9
- 帖子: 751
- 在線: 189.4小時
- 蟲號: 819723
- 注冊: 2009-07-31
- 性別: GG
- 專業(yè): 植物遺傳學
5樓2014-01-14 16:50:25
lvbobo823
鐵桿木蟲 (正式寫手)
- 應助: 363 (碩士)
- 金幣: 7753.3
- 散金: 15
- 紅花: 9
- 帖子: 751
- 在線: 189.4小時
- 蟲號: 819723
- 注冊: 2009-07-31
- 性別: GG
- 專業(yè): 植物遺傳學
6樓2014-01-14 16:57:54
gongeleven
鐵桿木蟲 (正式寫手)
- 應助: 55 (初中生)
- 金幣: 7107.8
- 散金: 222
- 紅花: 3
- 帖子: 432
- 在線: 152.9小時
- 蟲號: 1082982
- 注冊: 2010-08-27
- 性別: GG
- 專業(yè): 生物物理、生物化學與分子
7樓2014-01-15 08:49:25
j2
木蟲 (正式寫手)
- 應助: 56 (初中生)
- 金幣: 3797.8
- 散金: 2
- 紅花: 4
- 帖子: 688
- 在線: 108.8小時
- 蟲號: 452275
- 注冊: 2007-11-05
- 性別: MM
- 專業(yè): 衛(wèi)生檢驗
8樓2014-01-15 08:59:50
2樓2014-01-14 13:07:46
4樓2014-01-14 16:46:53
9樓2014-01-15 13:19:15
10樓2014-01-15 13:21:56
相關版塊跳轉
我要訂閱樓主 sr_913 的主題更新
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 材料專碩306英一數二 +9 | z1z2z3879 2026-03-16 | 12/600 |
|
|---|---|---|---|---|
|
|
[考博] 26博士申請 +3 | 1042136743 2026-03-17 | 3/150 |
|
|
[考研] 303求調劑 +3 | 睿08 2026-03-17 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 085601專碩，總分342求調劑，地區(qū)不限 +4 | share_joy 2026-03-16 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 277調劑 +5 | 自由煎餅果子 2026-03-16 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 274求調劑 +5 | 時間點 2026-03-13 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 304求調劑 +5 | 素年祭語 2026-03-15 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 327求調劑 +6 | 拾光任染 2026-03-15 | 11/550 |
|
|
|
[考研] 求老師收留調劑 +4 | jiang姜66 2026-03-14 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 0856專碩279求調劑 +5 | 加油加油！? 2026-03-15 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 材料與化工 323 英一+數二+物化，一志愿：哈工大 本人本科雙一流 +4 | 自由的_飛翔 2026-03-13 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 材料與化工求調劑一志愿 985 總分 295 +8 | dream…… 2026-03-12 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 308求調劑 +5 | 是Lupa啊 2026-03-11 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 四川大學085601材料工程專碩 初試294求調劑 +4 | 祝我們好在冬天 2026-03-11 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 311求調劑 +3 | 冬十三 2026-03-13 | 3/150 |
|
|
|
[碩博家園] 085600 260分求調劑 +3 | 天空還下雨么 2026-03-13 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 求調劑 +7 | 18880831720 2026-03-11 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 工科調劑 +4 | Jiang191123！ 2026-03-11 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 085600材料與化工 309分請求調劑 +7 | dtdxzxx 2026-03-12 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 283求調劑，材料、化工皆可 +8 | 蘇打水7777 2026-03-11 | 10/500 |
|