 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 5 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 3062 | 回復(fù): 10 | ||
| 當(dāng)前只顯示滿足指定條件的回帖，點(diǎn)擊這里查看本話題的所有回帖 | ||
sr_913金蟲 (初入文壇)
|
[求助]
質(zhì)粒構(gòu)建出了奇怪的現(xiàn)象，實(shí)在找不到原因，請(qǐng)大家?guī)兔纯? 已有2人參與
|
|
|
大家好！ 我現(xiàn)在在做Plk0.1-EGF載體重組質(zhì)粒的構(gòu)建。有幾個(gè)問題始終解決不了，找不到原因。 我是載體和目的基因（大小80bp）用EcoRI 和AgeI 37℃過夜雙酶切后，跑電泳，膠回收，然后用T4連接。連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化Stbl3感受態(tài). 做了連接的負(fù)對(duì)照，負(fù)對(duì)照長了四五個(gè)菌落，連接產(chǎn)物大概長十幾個(gè)菌落，但挑菌抽質(zhì)粒跑膠后，發(fā)現(xiàn)抽出來的質(zhì)粒比空載體小很多（估計(jì)2K左右）。這是什么原因呢？操作什么的應(yīng)該都沒有問題。另外，我們目前用的這個(gè)載體是前人改造過的，EcoRI 和AgeI酶切位點(diǎn)之間只有幾十bp大小的序列。 我看到 shRNA載體質(zhì)粒plko.1 mannual，上面說用EcoR I 和Age I分別酶切。并且Age I是先切的，這是為什么，一定要按這順序切嗎？不可以一起雙切嗎？ [ Last edited by sr_913 on 2014-1-14 at 12:54 ] |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)中的趣事：實(shí)驗(yàn)器材的 “烏龍”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)中的趣事：和實(shí)驗(yàn)材料的 “斗智斗勇”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤色/翻譯怎么收費(fèi)?
已經(jīng)有73人回復(fù)
-
蛋白質(zhì)檢測(cè)：精準(zhǔn)分析，解鎖生物分子的密碼
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之小鼠實(shí)驗(yàn)：嚴(yán)謹(jǐn)設(shè)計(jì)，解析生命機(jī)制的重要載體
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之重金屬檢測(cè)：精準(zhǔn)篩查，守護(hù)健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“蛙測(cè)重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標(biāo)南京
已經(jīng)有0人回復(fù)
» 本主題相關(guān)價(jià)值貼推薦，對(duì)您同樣有幫助:
- 連接轉(zhuǎn)化假陽性提不出來質(zhì)粒嗎？
已經(jīng)有8人回復(fù)
- 有重組質(zhì)粒，如何獲得其載體？
已經(jīng)有6人回復(fù)
- 十萬火急，重組質(zhì)粒酶切只有一條帶，測(cè)序有結(jié)果，但反復(fù)說我質(zhì)粒濃度很低
已經(jīng)有16人回復(fù)
- 【求助/交流】求助PCR-Targeting抗性基因質(zhì)粒
已經(jīng)有5人回復(fù)
sr_913
金蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 768.3
- 帖子: 22
- 在線: 24.5小時(shí)
- 蟲號(hào): 785728
- 注冊(cè): 2009-06-03
- 性別: MM
- 專業(yè): 生物化學(xué)
9樓2014-01-15 13:19:15
sr_913
金蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 768.3
- 帖子: 22
- 在線: 24.5小時(shí)
- 蟲號(hào): 785728
- 注冊(cè): 2009-06-03
- 性別: MM
- 專業(yè): 生物化學(xué)
2樓2014-01-14 13:07:46
gongeleven
鐵桿木蟲 (正式寫手)
- 應(yīng)助: 55 (初中生)
- 金幣: 7107.8
- 散金: 222
- 紅花: 3
- 帖子: 432
- 在線: 152.9小時(shí)
- 蟲號(hào): 1082982
- 注冊(cè): 2010-08-27
- 性別: GG
- 專業(yè): 生物物理、生物化學(xué)與分子
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
sr_913: 金幣+3, ★有幫助, 謝謝這位蟲友，希望得到進(jìn)一步解答 2014-01-14 16:50:40
sr_913(kx444555代發(fā)): 金幣+3, 鼓勵(lì)交流 2014-01-15 08:33:48
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
sr_913: 金幣+3, ★有幫助, 謝謝這位蟲友，希望得到進(jìn)一步解答 2014-01-14 16:50:40
sr_913(kx444555代發(fā)): 金幣+3, 鼓勵(lì)交流 2014-01-15 08:33:48
|
發(fā)現(xiàn)抽出來的質(zhì)粒比空載體小很多（估計(jì)2K左右）：環(huán)狀質(zhì)粒電泳的時(shí)候大小比線性的偏小。 可以雙切吧，可能以前的AgeI和EcoRI酶沒有共用buffer，所以分開切了 建議去測(cè)序，一切以測(cè)序結(jié)果為準(zhǔn)。 |
3樓2014-01-14 15:47:41
sr_913
金蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 768.3
- 帖子: 22
- 在線: 24.5小時(shí)
- 蟲號(hào): 785728
- 注冊(cè): 2009-06-03
- 性別: MM
- 專業(yè): 生物化學(xué)
4樓2014-01-14 16:46:53
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 332求調(diào)劑 +3 | 鳳凰院丁真 2026-03-20 | 3/150 |
|
|---|---|---|---|---|
|
|
[考研] 311求調(diào)劑 +5 | 冬十三 2026-03-18 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 22408 344分 求調(diào)劑 一志愿 華電計(jì)算機(jī)技術(shù) +4 | solanXXX 2026-03-20 | 4/200 |
|
|
[考研] 一志愿中海洋材料工程專碩330分求調(diào)劑 +8 | 小材化本科 2026-03-18 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 304求調(diào)劑 +7 | 司空. 2026-03-18 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 324求調(diào)劑 +5 | lucky呀呀呀鴨 2026-03-20 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 317求調(diào)劑 +5 | 申子申申 2026-03-19 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 一志愿西南交通 專碩 材料355 本科雙非 求調(diào)劑 +5 | 西南交通專材355 2026-03-19 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 289求調(diào)劑 +6 | 懷瑾握瑜l 2026-03-20 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 353求調(diào)劑 +3 | 拉鉤不許變 2026-03-20 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 085410人工智能專碩317求調(diào)劑（0854都可以） +4 | xbxudjdn 2026-03-18 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑 +3 | 暗涌afhb 2026-03-16 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 288求調(diào)劑，一志愿華南理工大學(xué)071005 +5 | ioodiiij 2026-03-17 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 344求調(diào)劑 +6 | knight344 2026-03-16 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 311求調(diào)劑 +11 | 冬十三 2026-03-15 | 12/600 |
|
|
|
[考研] 材料專碩306英一數(shù)二 +10 | z1z2z3879 2026-03-16 | 13/650 |
|
|
|
[考研] 312求調(diào)劑 +8 | 陌宸希 2026-03-16 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 一志愿南京大學(xué)，080500材料科學(xué)與工程，調(diào)劑 +4 | Jy? 2026-03-16 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 283求調(diào)劑 +3 | 聽風(fēng)就是雨； 2026-03-16 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 070305求調(diào)劑 +3 | mlpqaz03 2026-03-14 | 4/200 |
|