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ERIC20081938鐵桿木蟲 (小有名氣)
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木霉轉(zhuǎn)化求高手指點(diǎn) 已有4人參與
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如題,最近一直在做木霉的PEG介導(dǎo)原生質(zhì)體轉(zhuǎn)化,用的篩選抗性是潮霉素,可是做了很多次,板上都很干凈,一個都沒長,下面將我的轉(zhuǎn)化步驟大致說一下,求高手指點(diǎn): 1 活化孢子,在搖瓶中30℃,170rpm培養(yǎng)約14h,讓孢子萌發(fā)到一定長度。 2 制備原生質(zhì)體,酶解,用的是lysingzyme (sigma)約2h,最終得到濃度約為1*108/mL的原生質(zhì)體。 3 PEG介導(dǎo)轉(zhuǎn)化,質(zhì)粒濃度大于10ug,用的是25%的PEG6000。 4 上層瓊脂涂布篩選平板。 可能這樣說的也不是很清楚,跪求有經(jīng)驗(yàn)的高手指點(diǎn),感激不盡···· |

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