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小木蟲論壇-學術科研互動平臺 » 生物醫(yī)藥區(qū) » 微生物 » 實驗/技術 » 木霉轉化求高手指點
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ERIC20081938鐵桿木蟲 (小有名氣)
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[求助]
木霉轉化求高手指點 已有4人參與
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如題，最近一直在做木霉的PEG介導原生質體轉化，用的篩選抗性是潮霉素，可是做了很多次，板上都很干凈，一個都沒長，下面將我的轉化步驟大致說一下，求高手指點： 1 活化孢子，在搖瓶中30℃，170rpm培養(yǎng)約14h，讓孢子萌發(fā)到一定長度。 2 制備原生質體，酶解，用的是lysingzyme （sigma）約2h，最終得到濃度約為1*108/mL的原生質體。 3 PEG介導轉化，質粒濃度大于10ug，用的是25%的PEG6000。 4 上層瓊脂涂布篩選平板。 可能這樣說的也不是很清楚，跪求有經(jīng)驗的高手指點，感激不盡···· |
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