 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
小木蟲論壇-學術科研互動平臺 » 生物醫(yī)藥區(qū) » 分子生物 » 綜合其他 » 基因克隆流程
| 5 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 1777 | 回復: 11 | ||
| 當前只顯示滿足指定條件的回帖，點擊這里查看本話題的所有回帖 | ||
皇豬木蟲 (正式寫手)
|
[求助]
基因克隆流程 已有1人參與
|
|
|
春節(jié)來了，本人給大家先拜個年，祝大家馬年馬上有車，馬上有房，馬上有對象，馬上有金山。。。。。。 各位學者， 本人最近需要對100bp左右的PCR擴增產物測序，按照測序公司的要求，做了基因克隆，第一次做克隆吧，測序出來的結果顯示 序列有920bp，遠大于我的目的片段，而且測出的序列也不是我需要的，因年底從實驗室回家了，這個問題還沒有進行多深的探討，想在小木蟲 論壇上咨詢咨詢做過克隆測序的前輩，為了實現測序目的該怎么做基因克隆，具體流程怎樣？？？？ 再次向大家拜年，祝大家新年快樂，闔家歡樂�。�！ |
回復此樓» 猜你喜歡
不合理蛙科研實驗之小鼠實驗：嚴謹設計，解析生命機制的重要載體
已經有0人回復
-
不合理蛙科研實驗之重金屬檢測：精準篩查，守護健康與環(huán)境的防線
已經有0人回復
-
化學工程及工業(yè)化學論文潤色/翻譯怎么收費?
已經有187人回復
-
不合理蛙科研實驗之“蛙測重金屬我背鍋三千”
已經有0人回復
-
不合理蛙科研實驗之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經有0人回復
-
納米粒度分析
已經有3人回復
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標南京
已經有0人回復
-
留學--博士招生
已經有16人回復
-
化學工程，本211，求調劑，ab區(qū)不限
已經有4人回復
-
邵陽學院食品與化學工程學院碩士調劑
已經有0人回復
» 本主題相關價值貼推薦，對您同樣有幫助:
- 我想做兩個基因的融合克隆表達，怎么設計引物使兩個基因融合��？
已經有4人回復
- 急急急，如何設計一個已知基因的引物，克隆基因使原核表達，怒送金幣
已經有11人回復
- 克隆某一功能基因的全長，要不要做Race？
已經有7人回復
- 求助基因表達過程清晰圖片一張
已經有9人回復
- 做共表達，用什么克隆方法比較好呢？
已經有14人回復
- 推薦關于基因克隆、表達分析的審稿快的中文核心期刊
已經有7人回復
- 克隆基因選取 菜鳥！！
已經有9人回復
- 克隆基因，挑克隆拿去測序，好多點突怎么辦��？
已經有21人回復
- 我有幾個克隆和基因重組的基本問題不太清楚，請各位幫幫忙！
已經有6人回復
- 有關基因克隆，蛋白表達和純化的原理及操作步驟
已經有4人回復
- 真菌的基因克隆與表達 為什么要去除內含子？
已經有5人回復
- 請教各位高人，基因克隆表達的流程是什么？
已經有8人回復
- 克隆過程出現的問題
已經有7人回復
- 求助基因克隆視頻
已經有11人回復
- 【資料】基因克隆詳細步驟說明
已經有449人回復
- 基因克隆問題~~
已經有5人回復
- 【求助/交流】基因做表達實驗必須要克隆全長嗎？
已經有7人回復
- 【求助/交流】真菌的基因克隆與表達
已經有7人回復
4樓2014-01-31 00:59:09
Lau_Kimura
鐵蟲 (正式寫手)
- 應助: 41 (小學生)
- 金幣: 20.5
- 散金: 189
- 紅花: 19
- 帖子: 320
- 在線: 119.1小時
- 蟲號: 2468570
- 注冊: 2013-05-17
- 性別: GG
- 專業(yè): 作物分子育種
【答案】應助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感謝參與，應助指數 +1
kx444555: 金幣+5, 鼓勵交流 2014-01-30 08:03:17
皇豬: 金幣+3, ★★★很有幫助 2014-02-01 22:43:12
皇豬: 金幣+3, ★★★很有幫助 2014-02-02 13:21:04
感謝參與，應助指數 +1
kx444555: 金幣+5, 鼓勵交流 2014-01-30 08:03:17
皇豬: 金幣+3, ★★★很有幫助 2014-02-01 22:43:12
皇豬: 金幣+3, ★★★很有幫助 2014-02-02 13:21:04
|
最簡單的TA克�。═aq酶能夠在PCR產物的3’末端加上一個非模板依賴的A） Taq酶PCR，電泳檢測產物特異性（如有必要，切膠回收），異丙醇沉淀純化； 連接：Takara 的 pMD 18-T Vector試劑盒； 電擊轉化：取1-1.5微升重組質粒，40微升分裝的E.coli感受態(tài)，1100V，200歐姆（1mm電擊杯）； 涂板：2倍YT培養(yǎng)基（1mL）復蘇30min后，取100微升涂布抗性篩選平板； 搖菌：挑取單菌落加入抗性LB培養(yǎng)基中，搖菌過夜； PCR檢測：粗提質粒（200微升沉淀，加50微升水重懸浮，95度7分鐘裂解，離心取2微升上清做模版）。 提質粒，消化RNA，送測序即可。 |
2樓2014-01-29 23:32:55
bujunyang
木蟲 (正式寫手)
卓爾不群
- 應助: 15 (小學生)
- 金幣: 2600.8
- 散金: 299
- 紅花: 4
- 帖子: 829
- 在線: 205.8小時
- 蟲號: 808463
- 注冊: 2009-07-13
- 性別: GG
- 專業(yè): 蛋白質組學
【答案】應助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感謝參與，應助指數 +1
kx444555: 金幣+5, 鼓勵交流 2014-01-30 08:03:22
皇豬: 金幣+3 2014-02-01 22:43:16
皇豬: 金幣+2, ★★★很有幫助 2014-02-02 13:20:28
感謝參與，應助指數 +1
kx444555: 金幣+5, 鼓勵交流 2014-01-30 08:03:22
皇豬: 金幣+3 2014-02-01 22:43:16
皇豬: 金幣+2, ★★★很有幫助 2014-02-02 13:20:28
| 建議你還是先了解一下測序原理。一個測序反應一般可以測800到1000bp。測序的結果，前邊的幾十個堿基和最后的幾十個堿基是測不準確的，所以測序公司會建議把DNA片段連接到一個載體上去，測序反應從載體開始，這樣就可以保證你的序列不會落到最前面的幾十個堿基中。你需要做的是做連接和轉化，挑選正確的克隆送去測序，然后從返回的結果中找到你的序列。 |
3樓2014-01-30 00:16:21
5樓2014-02-02 08:21:43
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 學碩274求調劑 +8 | Li李魚 2026-03-26 | 8/400 |
|
|---|---|---|---|---|
|
|
[考研] 壓國家一區(qū)線，求導師收留，有恩必謝！ +7 | 迷人的哈哈 2026-03-28 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 求調劑 +6 | 爭取九點睡 2026-03-28 | 6/300 |
|
|
[考研] 求調劑 +6 | 蘆lty 2026-03-25 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 085701環(huán)境工程求調劑 +9 | 多久上課 2026-03-27 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 272求調劑 +7 | 腳滑的守法公民 2026-03-27 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 283求調劑（080500） +4 | A child 2026-03-27 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 085600，材料與化工321分，求調劑 +9 | 大饞小子 2026-03-27 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 一志愿鄭大085600，310分求調劑 +5 | 李瀟可 2026-03-26 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 調劑推薦 +5 | 清酒714 2026-03-26 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 081200-11408-276學碩求調劑 +4 | 崔wj 2026-03-26 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 一志愿北化求調劑 +3 | Jsman 2026-03-22 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 081200-11408-276學碩求調劑 +3 | 崔wj 2026-03-26 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 340求調劑 +3 | Amber00 2026-03-26 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 一志愿哈工大，085400，320，求調劑 +4 | gdlf9999 2026-03-24 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 296求調劑 +4 | 汪��？！ 2026-03-25 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 一志愿吉林大學材料與化工303分求調劑 +4 | 為學666 2026-03-24 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 一志愿武理085500機械專業(yè)總分300求調劑 +3 | an10101 2026-03-24 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 一志愿北化315 求調劑 +3 | akrrain 2026-03-24 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 293求調劑 +3 | 濤濤Wjt 2026-03-22 | 5/250 |
|