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[交流] 標(biāo)準(zhǔn)曲線方法求鑒定

本人藥物化學(xué)專業(yè)，不常使用標(biāo)準(zhǔn)曲線。現(xiàn)有一樣品，本人通過其他方法得到其中的目標(biāo)產(chǎn)物，并測定樣品中目標(biāo)物質(zhì)含量在5%左右，而提供樣品者堅信其中必定還有40%以上的樣品，其理由是在247nm下HPLC圖中峰面積為40%，雖然我知道他這樣的推測不嚴(yán)謹(jǐn)，但是為了更具說服力，現(xiàn)在準(zhǔn)備做一個標(biāo)準(zhǔn)曲線。打算采用如下實(shí)驗方法：
波長247nm，進(jìn)樣量10μl

取標(biāo)準(zhǔn)品25mg用色譜甲醇定容直5ml，取部分作為5mg/ml的標(biāo)準(zhǔn)品溶液1。
取標(biāo)準(zhǔn)品1溶液2.5ml定容至5ml，取部分作為2.5mg/ml的標(biāo)準(zhǔn)品溶液2。
取標(biāo)準(zhǔn)品2溶液2.5ml定容至5ml，取部分作為1.25mg/ml的標(biāo)準(zhǔn)品溶液3。
取標(biāo)準(zhǔn)品3溶液2.5ml定容至5ml，取部分作為0.625mg/ml的標(biāo)準(zhǔn)品溶液4。
取標(biāo)準(zhǔn)品4溶液2.5ml定容至5ml，取部分作為0.3125mg/ml的標(biāo)準(zhǔn)品溶液5。
取標(biāo)準(zhǔn)品5溶液2.5ml定容至5ml，取部分作為0.15625mg/ml的標(biāo)準(zhǔn)品溶液6。
取標(biāo)準(zhǔn)品6溶液2.5ml定容至5ml，取部分作為0.078125mg/ml的標(biāo)準(zhǔn)品溶液7。
取標(biāo)準(zhǔn)品7溶液2.5ml定容至5ml，取部分作為0.039125mg/ml的標(biāo)準(zhǔn)品溶液8。

通過對標(biāo)準(zhǔn)溶液1至8的液相響應(yīng)值與濃度間的關(guān)系，建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。

取樣品25mg，定容至5ml，測定響應(yīng)值，再通過標(biāo)準(zhǔn)曲線求樣品量。

以上實(shí)驗步驟是否存在問題，請不吝賜教！謝謝！

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1樓 2014-02-08 19:19:26

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yeer

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濃度是否高了點(diǎn)？5mg/ml？至于嗎？

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2樓2014-02-08 19:55:22

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pony3598: 金幣+1 2014-02-08 22:10:10

方法倒是可以，但沒必要搞那么復(fù)雜，你配個5%的標(biāo)樣和樣品一起同條件進(jìn)行HPLC分析，進(jìn)行峰面積對比即可。
還有你說的提供樣品者堅信其中必定還有40%以上的樣品，其理由是在247nm下HPLC圖中峰面積為40%，他的理由是不對的，峰面積的比值和樣品中各組分對檢測器的靈敏度有關(guān)。

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3樓2014-02-08 21:41:26

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引用回帖:

3樓: Originally posted by rfq123 at 2014-02-08 21:41:26
方法倒是可以，但沒必要搞那么復(fù)雜，你配個5%的標(biāo)樣和樣品一起同條件進(jìn)行HPLC分析，進(jìn)行峰面積對比即可。
還有你說的提供樣品者堅信其中必定還有40%以上的樣品，其理由是在247nm下HPLC圖中峰面積為40%，他的理由是 ...

嗯，你這樣的方法也很不錯，謝謝！

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4樓2014-02-08 22:10:07

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天天2016

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pony3598: 金幣+1 2014-02-14 12:40:44

其理由是在247nm下HPLC圖中峰面積為40%
不同物質(zhì)在247nm下峰面積占到40%，含量就40%了�。�！相同的色譜條件，多換幾個波長來做，這個物質(zhì)的峰面積有可能大于40%，也有可能小于40%，你再問問提供樣品者如何解釋呢? 不同物質(zhì)靈敏度不同的�。�！
樓主工作曲線這么做太辛苦了，如果不太專業(yè)的話是可以的，專業(yè)一點(diǎn)你做出來的不一定可用了。你的LC沒有自動進(jìn)樣器嘛？配制一個濃度，不同進(jìn)樣體積就可以了啊
希望對你有幫助哈

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5樓2014-02-09 18:10:17

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zgd1303

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引用回帖:

5樓: Originally posted by 天天2016 at 2014-02-09 18:10:17
其理由是在247nm下HPLC圖中峰面積為40%
不同物質(zhì)在247nm下峰面積占到40%，含量就40%了啊？！相同的色譜條件，多換幾個波長來做，這個物質(zhì)的峰面積有可能大于40%，也有可能小于40%，你再問問提供樣品者如何解釋呢? ...

你好，你說的“配制一個濃度，不同進(jìn)樣體積就可以了啊”，但是它的濃度還是不變的呀，只是體積增加而已，峰面積不是濃度的一個響應(yīng)嗎？

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6樓2014-12-15 16:16:56

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