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[求助]
連接效率低，重組質(zhì)粒無法酶切 已有1人參與
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求助各位，本人最近克隆十分不順利，T載體自連情況嚴(yán)重，轉(zhuǎn)化后白斑很少，全是藍(lán)色和淡藍(lán)色菌落，挑選五個菌落，三個白色和兩個淡藍(lán)色，質(zhì)粒小提后酶切檢測，蘭斑倒是能切開，但無法理解白斑無法酶切，T載體為實驗室自制，載體上有一個酶切位點。以前實驗要么是切不對，就是沒插入目的片段，要么是一條帶，沒有插入片段。但最近經(jīng)常出現(xiàn)這種無法酶切的情況，不知哪里出了問題，懇請各位大牛幫忙分析分析！小弟不勝感激！ 下圖中Marker為Thermo 10kb ladder，條帶依次為三個白斑和兩個淡藍(lán)斑，Thermo 普通限制酶 ApaI，10ul體系，37度酶切4小時。 1.jpg |
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lvbobo823
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