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關(guān)于納米金探針鏈接細胞膜表面整聯(lián)蛋白亞基問題，新蟲，金幣不多，誠心求教。 已有1人參與
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以下是我讀了一些文獻，總結(jié)出來的方法，請各位幫忙指教一下其中的錯誤吧，謝謝了。 我做過一次，結(jié)果是納米金探針和納米金的紫外分光光度比較，探針發(fā)生紅移了，也就是說我是探針成功了，但是最后卻連不上細胞，請求幫助。 一。納米金對兔IgG的吸附： 1.納米金標(biāo)記IgG的最佳pH值一般在9.0左右。將調(diào)好pH的膠體金,分裝8管,每管1 mL。2.將IgG以0.005 mol/L pH=9.0硼酸鹽緩沖液稀釋為5~50mg/mL系列,分別取1 mL,加入到上述金膠溶液中(2~7號管),混勻。空白對照管(1號管)只加1 mL緩沖液,空白對照管(8號管)則加1 mL雙蒸水。 3.5 min后,在上述各管中加入0.1 mL質(zhì)量分數(shù)10%NaCl溶液,混勻后靜置2h,觀察結(jié)果�？梢钥闯�30~50Lg/mL的抗體溶液能穩(wěn)定膠體金溶液,說明此質(zhì)量濃度下抗體膠體金比例合適。 4.探針制備過程 A．取納米金溶液1 mL，用K2C03調(diào)PH值為9。 B．加入一抗2.5ul(濃度10mg/ml)室溫孵育l h。 C．加入20ul 1%BSA穩(wěn)定和鈍化納米金。 D．12000rpm離心15min，去上清后，加入1ml 1%BSA溶解，4℃?zhèn)溆谩?br /> 二。納米金探針與膜蛋白鏈接 1. 將單核細胞取出到離心管，4° C ，30分鐘，在PBS內(nèi)。 2. 洗點PBS加入1%BSA，4°進行，反應(yīng)30MIN. 3. 直接加入納米金探針，反應(yīng)1H，4°C進行。 4. 離心2500g，10min，4°C，洗3次。 三。關(guān)于檢測 1.想知道如果我把納米金探針鏈接到細胞膜蛋白上這個整體如果做電鏡的話應(yīng)該選擇什么電鏡？電鏡具體的方法應(yīng)該怎么做 2.以上我的相應(yīng)的檢測方法都能有哪些啊，請指點一點。 萬分感謝，金幣不多，真心求學(xué)。 |
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3樓2018-04-20 14:53:40
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