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關(guān)于納米金探針鏈接細(xì)胞膜表面整聯(lián)蛋白亞基問題,新蟲,金幣不多,誠(chéng)心求教。 已有1人參與
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以下是我讀了一些文獻(xiàn),總結(jié)出來的方法,請(qǐng)各位幫忙指教一下其中的錯(cuò)誤吧,謝謝了。 我做過一次,結(jié)果是納米金探針和納米金的紫外分光光度比較,探針發(fā)生紅移了,也就是說我是探針成功了,但是最后卻連不上細(xì)胞,請(qǐng)求幫助。 一。納米金對(duì)兔IgG的吸附: 1.納米金標(biāo)記IgG的最佳pH值一般在9.0左右。將調(diào)好pH的膠體金,分裝8管,每管1 mL。2.將IgG以0.005 mol/L pH=9.0硼酸鹽緩沖液稀釋為5~50mg/mL系列,分別取1 mL,加入到上述金膠溶液中(2~7號(hào)管),混勻?瞻讓(duì)照管(1號(hào)管)只加1 mL緩沖液,空白對(duì)照管(8號(hào)管)則加1 mL雙蒸水。 3.5 min后,在上述各管中加入0.1 mL質(zhì)量分?jǐn)?shù)10%NaCl溶液,混勻后靜置2h,觀察結(jié)果?梢钥闯30~50Lg/mL的抗體溶液能穩(wěn)定膠體金溶液,說明此質(zhì)量濃度下抗體膠體金比例合適。 4.探針制備過程 A.取納米金溶液1 mL,用K2C03調(diào)PH值為9。 B.加入一抗2.5ul(濃度10mg/ml)室溫孵育l h。 C.加入20ul 1%BSA穩(wěn)定和鈍化納米金。 D.12000rpm離心15min,去上清后,加入1ml 1%BSA溶解,4℃?zhèn)溆谩?br /> 二。納米金探針與膜蛋白鏈接 1. 將單核細(xì)胞取出到離心管,4° C ,30分鐘,在PBS內(nèi)。 2. 洗點(diǎn)PBS加入1%BSA,4°進(jìn)行,反應(yīng)30MIN. 3. 直接加入納米金探針,反應(yīng)1H,4°C進(jìn)行。 4. 離心2500g,10min,4°C,洗3次。 三。關(guān)于檢測(cè) 1.想知道如果我把納米金探針鏈接到細(xì)胞膜蛋白上這個(gè)整體如果做電鏡的話應(yīng)該選擇什么電鏡?電鏡具體的方法應(yīng)該怎么做 2.以上我的相應(yīng)的檢測(cè)方法都能有哪些啊,請(qǐng)指點(diǎn)一點(diǎn)。 萬分感謝,金幣不多,真心求學(xué)。 |

銅蟲 (初入文壇)
銀蟲 (小有名氣)

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