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關(guān)于納米金探針鏈接細(xì)胞膜表面整聯(lián)蛋白亞基問題，新蟲，金幣不多，誠心求教。 已有1人參與
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以下是我讀了一些文獻(xiàn)，總結(jié)出來的方法，請各位幫忙指教一下其中的錯(cuò)誤吧，謝謝了。 我做過一次，結(jié)果是納米金探針和納米金的紫外分光光度比較，探針發(fā)生紅移了，也就是說我是探針成功了，但是最后卻連不上細(xì)胞，請求幫助。 一。納米金對兔IgG的吸附： 1.納米金標(biāo)記IgG的最佳pH值一般在9.0左右。將調(diào)好pH的膠體金,分裝8管,每管1 mL。2.將IgG以0.005 mol/L pH=9.0硼酸鹽緩沖液稀釋為5~50mg/mL系列,分別取1 mL,加入到上述金膠溶液中(2~7號管),混勻。空白對照管(1號管)只加1 mL緩沖液,空白對照管(8號管)則加1 mL雙蒸水。 3.5 min后,在上述各管中加入0.1 mL質(zhì)量分?jǐn)?shù)10%NaCl溶液,混勻后靜置2h,觀察結(jié)果�？梢钥闯�30~50Lg/mL的抗體溶液能穩(wěn)定膠體金溶液,說明此質(zhì)量濃度下抗體膠體金比例合適。 4.探針制備過程 A．取納米金溶液1 mL，用K2C03調(diào)PH值為9。 B．加入一抗2.5ul(濃度10mg/ml)室溫孵育l h。 C．加入20ul 1%BSA穩(wěn)定和鈍化納米金。 D．12000rpm離心15min，去上清后，加入1ml 1%BSA溶解，4℃?zhèn)溆谩?br /> 二。納米金探針與膜蛋白鏈接 1. 將單核細(xì)胞取出到離心管，4° C ，30分鐘，在PBS內(nèi)。 2. 洗點(diǎn)PBS加入1%BSA，4°進(jìn)行，反應(yīng)30MIN. 3. 直接加入納米金探針，反應(yīng)1H，4°C進(jìn)行。 4. 離心2500g，10min，4°C，洗3次。 三。關(guān)于檢測 1.想知道如果我把納米金探針鏈接到細(xì)胞膜蛋白上這個(gè)整體如果做電鏡的話應(yīng)該選擇什么電鏡？電鏡具體的方法應(yīng)該怎么做 2.以上我的相應(yīng)的檢測方法都能有哪些啊，請指點(diǎn)一點(diǎn)。 萬分感謝，金幣不多，真心求學(xué)。 |
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