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飄凝alice木蟲 (正式寫手)
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[求助]
皮膚細(xì)胞培養(yǎng)方法 已有1人參與
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yipan 
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
飄凝alice: 金幣+5 2014-02-20 14:24:36
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飄凝alice: 金幣+5 2014-02-20 14:24:36
| 人皮膚成纖維細(xì)胞經(jīng)分離得到后，在體外容易培養(yǎng)，培養(yǎng)基為DMEM(Dulbecco MEM)+10%NBS(小牛血清)或者RPMI-1640+10%NBS(小牛血清)，培養(yǎng)方法主要有兩種：靜態(tài)培養(yǎng)和動(dòng)態(tài)培養(yǎng)[10]。靜態(tài)培養(yǎng)，即在培養(yǎng)時(shí)培養(yǎng)液靜止不動(dòng)，這種方法操作簡單，不易染菌。但由于營養(yǎng)液不動(dòng)，細(xì)胞從營養(yǎng)液中攝取營養(yǎng)或向外排出代謝產(chǎn)物都不很充分，細(xì)胞氣體交換要通過培養(yǎng)液厚層，這些不利于細(xì)胞的生長。而動(dòng)態(tài)培養(yǎng)是一種懸浮培養(yǎng)狀態(tài)，細(xì)胞混合均勻，營養(yǎng)利用充分，利于細(xì)胞的生長。以往人們常用方瓶靜態(tài)培養(yǎng)人皮膚成纖維細(xì)胞，但人皮膚成纖維細(xì)胞是一種貼壁細(xì)胞，在方瓶中培養(yǎng)時(shí)受到表面積限制，獲得的細(xì)胞產(chǎn)量低，一般不能滿足組織工程皮膚的大量需要。當(dāng)細(xì)胞生長融合率達(dá)90﹪以上時(shí)，倒掉瓶內(nèi)舊培養(yǎng)液，用PBS（pH 7.2～7.4）洗三次，加入1ml的0.25﹪胰蛋白酶溶液，消化1～3min后把培養(yǎng)瓶放置在倒置顯微鏡下進(jìn)行觀察，發(fā)現(xiàn)細(xì)胞回縮、細(xì)胞間隙增大后，加含10﹪NBS的RPMI-1640或DMEM培養(yǎng)液終止消化。用彎頭吸管輕輕吹打，使細(xì)胞脫離瓶壁后形成細(xì)胞懸液，計(jì)數(shù)，以 1:3的比例接種至 100ml培養(yǎng)瓶中[11]，待細(xì)胞生長融合率達(dá)90﹪以上，進(jìn)行下一次傳代。 |
2樓2014-02-19 13:35:17
treetreew
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3樓2014-02-19 13:40:10
飄凝alice
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4樓2014-02-19 17:12:14
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7樓2014-11-07 12:40:20
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