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永遠(yuǎn)一片天新蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
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[求助]
質(zhì)粒pMD19的測(cè)序引物，RV-M 和M13F(-47)指的是質(zhì)粒什么位置的引物 已有3人參與
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| 質(zhì)粒pMD19的測(cè)序引物，RV-M 和M13F(-47)指的是質(zhì)粒什么位置的引物，它們之間的距離有多少bp堿基，我轉(zhuǎn)化了一段440bp片段的DNA用這兩條引物測(cè)序，測(cè)序結(jié)果是1200多bp,pMD19質(zhì)粒就2697bp了，為什么測(cè)序結(jié)果那么短，奇怪的是這段序列里面正好包含我的那段DNA序列。 |
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西門(mén)吹雪170
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2樓2014-02-22 14:50:34
zhaozhibozhi
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【答案】應(yīng)助回帖
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這兩個(gè)引物分別位于你轉(zhuǎn)化片段左右兩側(cè)50bp左右。測(cè)序的話，你需要的是兩測(cè)序引物之間的片段，大約550bp。 測(cè)序結(jié)果是1200多bp的原因在于：當(dāng)用RV-M測(cè)的時(shí)候，從該引物開(kāi)始，一般后續(xù)的800-1000 bp是可用的；M13F(-47)亦如是；拼接后大概得到1200bp可用序列，包括目的片段及其左右兩端的部分載體序列。 |
3樓2014-02-22 19:09:41
lvbobo823
鐵桿木蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
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4樓2014-02-22 19:21:49
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