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鬼羽帝魂木蟲 (著名寫手)
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[求助]
關(guān)于重組克隆實驗中遇到的比較奇怪的問題 已有3人參與
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最近實驗中遇到一個比較奇怪的問題： 在一個載體上用AscI+SmaI切下一片斷，將目的基因連上（兩端為AscI+SmaI）。目的基因是通過SOE-PCR做的，中間為SfiI酶切位點. 挑單克隆后，重組質(zhì)粒要比原先的質(zhì)粒小，而且SfiI切不開�；蛟S有人說這是假陽性，我也知道，但奇怪的在下面。 我用載體上的另一個酶切位點SacI分別單酶切質(zhì)粒與重組質(zhì)粒，原先質(zhì)�？梢郧虚_線性化，而重組質(zhì)粒卻切不開。（兩者反應(yīng)條件一樣） 在構(gòu)建過程中，酶切位點SacI一直沒有進(jìn)行改動。 一位師兄說，可能載體制備的有問題，載體斷開了。 我卻覺得我重新做了3次都這樣，是不是不是載體的問題？？？ 請各位分析一下，不勝感激。 |
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2樓2014-03-03 22:21:45
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可以試試這篇論文的方法，雖然是個小的改進(jìn)，但是值得一試，而且很方便： http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/24613256 |
17樓2014-03-25 09:41:59
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3樓2014-03-03 22:35:02
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4樓2014-03-03 22:35:46
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5樓2014-03-03 23:00:57
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6樓2014-03-04 10:50:59
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7樓2014-03-04 10:53:18
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9樓2014-03-04 12:00:07
| 祝福 |
10樓2014-03-04 12:44:41
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