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有用同源重組法進(jìn)行基因克隆和載體構(gòu)建的嗎？ 已有1人參與
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| 有用同源重組法進(jìn)行基因克隆和載體構(gòu)建的嗎？這個(gè)技術(shù)比傳統(tǒng)的ta克隆好用嗎，做起來困難否？求教！ |
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【答案】應(yīng)助回帖
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kx444555: 金幣+1, 還有INVITROGEN 的GATEWAY技術(shù) 2012-11-26 22:08:19
gyesang: 回帖置頂 2013-05-14 02:01:59
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gyesang: 回帖置頂 2013-05-14 02:01:59
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你是說的in fusion的方法做克隆嗎？這里有介紹： http://www.clontech.com/US/Produ ... ning_Kits-HD-Liquid 我們用的是這個(gè)。你可以直接PCR一個(gè)片段（引物設(shè)計(jì)有要求），把載體切成線性的，然后用同源重組的方法克隆，效果很好，尤其是找不到合適的酶切位點(diǎn)的時(shí)候更合適�，F(xiàn)在我們用這個(gè)方法克隆了不少片段了。相比傳統(tǒng)的TA克隆，這種方法可以直接克隆到目的載體中，不需要中間步驟。但是片段濃度要高。就是貴了點(diǎn)。不過我們每次就用2ul體系就可以了。 |
4樓2012-11-19 16:01:02
gyesang
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2樓2012-11-18 18:55:23
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3樓2012-11-18 20:21:47
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yx_sun70(gyesang代發(fā)): 金幣+1, 鼓勵(lì)回帖應(yīng)助！ 2013-05-14 02:01:40
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相對(duì)TA克隆這種方法的優(yōu)點(diǎn)是： 片段一步克隆到表達(dá)載體 不受載體和酶切位點(diǎn)限制 一次性可完成多片段無縫克隆 能解決傳統(tǒng)方法難以解決的問題，成功率及陽(yáng)性率真遠(yuǎn)高于傳統(tǒng)克隆 缺點(diǎn)是一個(gè)是貴了點(diǎn)，in-fusion，國(guó)內(nèi)的也有，便宜些clonexpress 另一個(gè)缺點(diǎn)是習(xí)慣問題，沒用過這種方法的人第一次做不太習(xí)慣的，用久了挺好用的，很快  |
5樓2012-11-26 20:45:17
6樓2013-04-29 11:20:43
7樓2013-05-13 17:29:22
8樓2014-10-09 10:45:15
9樓2015-06-02 16:48:56
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