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酵母基因敲除，PCR驗證遇到的問題。 已有4人參與
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這是我的PCR驗證酵母基因敲除（方法就是常用的同源重組法，醋酸鋰轉(zhuǎn)化）泳道1出現(xiàn)的是從pUG6擴增disruption cassette 的一對引物，2-5泳道是A-B，6-9泳道是C-D，10-13泳道是A-D，（其中A、D是目的基因兩側(cè)的引物，B、C是目的基因內(nèi)部的引物，B-M、C-M是marker內(nèi)部的引物）不過，A、B-M和C-M、D并沒有條帶，所有樣品都是用酵母菌液（凍融處理）作為模版。 我的問題是，我的A-D條帶大小說明目的基因還在，且A-B，C-D的條帶也說明了這點，但是為什么我的泳道1還有大小與我的disruption cassette 相同的條帶呢？而且我今天做了個disruptionF，B-M和C-M，disruptionR兩對引物，都有大小與預(yù)期相同的條帶。說明disruption cassette 已經(jīng)在酵母細胞中了。。。沒有發(fā)生同源重組？ 各位分析一下什么情況…… yeast2 編輯.jpg |
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