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diguoxueye

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[交流] 測(cè)定蔬菜的MDA遇到的問(wèn)題已有2人參與

我在測(cè)定MDA值的過(guò)程中遇到了幾個(gè)問(wèn)題。
1.TBA的TCA溶液穩(wěn)定性比較差。TBA很難溶于TCA，所以，我是加熱溶解，結(jié)果溶液冷卻后，有出現(xiàn)少量的懸浮物。
2.同一批次的蔬菜樣品，都是采用100℃左右的溫度加熱15min（用電磁爐加熱，所以，溫度可能在100℃左右波動(dòng)），采用同樣的實(shí)驗(yàn)方法，結(jié)果測(cè)定的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)中450nm的吸光值遠(yuǎn)大于532nm以及600nm處的吸光值。并且，平行實(shí)驗(yàn)的結(jié)果的穩(wěn)定性很差，有時(shí)候，平行實(shí)驗(yàn)的MDA含量都是正值，有時(shí)都是負(fù)值，有時(shí)候既有正值，又有負(fù)值，但是平行試驗(yàn)之間的差值很大，甚至不再一個(gè)數(shù)量級(jí)上。有沒(méi)有什么辦法可以提高532nm吸光值，減小450nm處吸光值?
3.我采用的是下面的計(jì)算公式

其中，V0測(cè)定液體積是指什么？

360軟件小助手截圖20140305114022.jpg

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1樓 2014-03-05 11:42:54

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mixi113

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1.溶解速度確實(shí)慢，一般我是提前半天到一天的時(shí)間配好，有少量懸浮物也算正常，我做的時(shí)候也這樣。
2.當(dāng)時(shí)我也采用的你這個(gè)實(shí)驗(yàn)方法，結(jié)果和你差不多，所以直接把這個(gè)指標(biāo)廢棄了。100℃水浴時(shí)，樣品都能沸騰，最好還是溫度低一些吧。師弟做的時(shí)候是改用80℃水浴，lz再查幾篇文獻(xiàn)查考一下吧。
3.V0就是你從VT中取出用來(lái)測(cè)定吸光度的提取液的體積。比如說(shuō)，假設(shè)取10g鮮樣提取定容至100mL，這100mL就是VT，提取液總體積；量取1.0mL提取液放入試管，再加入5.0mLTBA，反應(yīng)后待測(cè)，那么這里所量取的1.0mL提取液就是V0。

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2樓2014-03-05 12:59:10

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1、溶解的時(shí)候超聲一下
2、沸水浴怎么會(huì)溫度不穩(wěn)定？

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3樓2014-03-07 16:55:56

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引用回帖:

2樓: Originally posted by mixi113 at 2014-03-05 12:59:10
1.溶解速度確實(shí)慢，一般我是提前半天到一天的時(shí)間配好，有少量懸浮物也算正常，我做的時(shí)候也這樣。
2.當(dāng)時(shí)我也采用的你這個(gè)實(shí)驗(yàn)方法，結(jié)果和你差不多，所以直接把這個(gè)指標(biāo)廢棄了。100℃水浴時(shí)，樣品都能沸騰，最好 ...

你好。如果我采用以下方法呢？稱取蔬菜樣品3g，30mL 100g/L TCA溶液，研磨，過(guò)濾。
再取4mL上清液（對(duì)照組：加4.0mL 100g/L TCA）,加4.0mL0.67%TBA，混合后在沸水浴中20min，取出冷卻，分別測(cè)定在450,532,600nm處波長(zhǎng)。
請(qǐng)問(wèn)下面這個(gè)公式是不是合適。
MDA=（6.45*（OD532-OD600）-0.559OD450）*V/(Vs*m*1000)
V——樣品提取液總體積，mL
Vs——測(cè)定時(shí)所取樣品提取液體積，mL
m——樣品質(zhì)量，g
但是根據(jù)我自己的分析，這個(gè)公式好像不是很對(duì)。我覺(jué)得應(yīng)該是下面這個(gè)公式
MDA=（6.45*（OD532-OD600）-0.559OD450）*V*V1/(Vs*m*1000);
V——樣品提取液總體積，mL
Vs——測(cè)定時(shí)所取樣品提取液體積，mL
m——樣品質(zhì)量，g
V1——測(cè)定吸光度時(shí)的混合液總體積，mL
但是按照這兩個(gè)公式，計(jì)算出來(lái)的MDA都非常低，基本上在10的-2次方水平上。不知道是不是因?yàn)楣讲徽_。

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4樓2014-06-12 11:13:10

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引用回帖:

4樓: Originally posted by diguoxueye at 2014-06-12 11:13:10
你好。如果我采用以下方法呢？稱取蔬菜樣品3g，30mL 100g/L TCA溶液，研磨，過(guò)濾。
再取4mL上清液（對(duì)照組：加4.0mL 100g/L TCA）,加4.0mL0.67%TBA，混合后在沸水浴中20min，取出冷卻，分別測(cè)定在450,532,600nm處 ...

還是第一個(gè)公式是對(duì)的。MDA的含量不可能很高的，畢竟它是膜脂過(guò)氧化作用的產(chǎn)物之一。

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5樓2014-06-12 21:02:46

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