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小木蟲論壇-學術(shù)科研互動平臺 » 生物醫(yī)藥區(qū) » 分子生物 » DNA重組 » 雙酶切
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licunyu鐵蟲 (初入文壇)
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[求助]
雙酶切 已有3人參與
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最近在做雙酶切（TAKARA家的Xba1/Xho1 共用Buffer為10XM）,想重新構(gòu)建真核表達載體（目的片段210bp+載體） 1、雙酶切（20μl體系，1-3小時都試過），只能切開Xho1位點（與分步酶切對照過） 2、分步雙酶切，第一步酶切，不管先切哪個位點，跑膠檢測都能切開，但是到第二步酶切結(jié)束，想切膠回收的時候，卻怎么也跑不出條帶來了，只是模糊的一片，像拖帶一樣，我的DNA去哪兒了？愁死了，求高手指點迷津，感激不盡啊，跪謝�。�！ 注：關(guān)于分步酶切膠回收損失的問題，我特意在第一步酶切結(jié)束后，嘗試過三種方法 a、切膠回收（測得濃度為60ng左右） b、不跑膠，直接在原體系里進行第二步酶切 c、不跑膠，直接過柱回收（切膠回收試劑盒，不是專業(yè)的DNA分離柱） |
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licunyu
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9樓2014-03-11 14:46:46
lihe131
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2樓2014-03-09 16:08:26
licunyu
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3樓2014-03-09 16:46:09
lvbobo823
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4樓2014-03-09 21:34:20
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