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blodemaster新蟲 (初入文壇)
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[求助]
進(jìn)行overlap pcr，結(jié)果不僅沒有目的片段，跑膠的條帶都比模板長(zhǎng)度還短 已有3人參與
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最近小弟正在做clone，想通過overlap pcr把兩組已經(jīng)fusion過的基因（兩個(gè)基因已經(jīng)連接了）再連接在一起， pcr也采用了2步法，先將兩個(gè)模板（每個(gè)2μl）（長(zhǎng)度都在1.5kb左右）以60°c退火溫度，做15個(gè)循環(huán) 之后加1μl的F，1μ的R引物，再以touchdown（從60-50°c）做10個(gè)cycle，最后以50°c的退火溫度循環(huán)25次 結(jié)果跑膠不僅沒有目的條帶，而且p出來的條帶在500bp，和120bp 附：marker用的DM5000 3-10-(+u)2.jpg |
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2樓2014-03-10 20:57:14
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3樓2014-03-11 09:57:37
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4樓2014-03-11 10:34:00
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