 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 查看: 3874 | 回復(fù): 15 | ||
小周鐵桿木蟲 (著名寫手)
|
[求助]
重疊延伸PCR引物合成求助
|
|
|
最近想把兩個(gè)DNA片段連起來，想用SOE PCR的方法，看了半天引物設(shè)計(jì)時(shí)都沒有搞明白。 假設(shè)我的片段A序列為：5’CGA GGATCCAG CATG GAG ACA GAC ACA CTC CTG CTA TGG GTA CTG ........ ACT GGT GACCAT CAT CAC CAT CAC CAT3’ B片段的序列為：5’GACGATGACGACAAGccagtaccccc................agggctcttcggcaaatgtaaGTCGACCAGG3’ 希望的結(jié)果為A在前B在后： 5’CGA GGATCCAG CATG GAG ACA GAC ACA CTC CTG CTA TGG GTA CTG ........ ACT GGT GACCAT CAT CAC CAT CACCATGACGATGACGACAAGccagtaccccc................agggctcttcggcaaatgtaaGTCGACCAGG3’ 中間兩條引物該怎樣設(shè)計(jì)呢？謝謝 |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
一志愿中海洋材料工程專碩330分求調(diào)劑
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
328求調(diào)劑，英語六級(jí)551，有科研經(jīng)歷
已經(jīng)有9人回復(fù)
-
【同濟(jì)軟件】軟件（085405）考研求調(diào)劑
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
一志愿吉林大學(xué)材料學(xué)碩321求調(diào)劑
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
267一志愿南京工業(yè)大學(xué)0817化工求調(diào)劑
已經(jīng)有7人回復(fù)
-
一志愿華中科技大學(xué)，080502，354分求調(diào)劑
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
一志愿中國海洋大學(xué)，生物學(xué)，301分，求調(diào)劑
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
一志愿武理材料305分求調(diào)劑
已經(jīng)有6人回復(fù)
-
材料專碩英一數(shù)二306
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
085600材料與化工調(diào)劑 324分
已經(jīng)有7人回復(fù)
» 本主題相關(guān)價(jià)值貼推薦，對(duì)您同樣有幫助:
- 要合成文獻(xiàn)中的引物，但沒有表明方向，只給了右引物 和左引物不知怎么合成
已經(jīng)有5人回復(fù)
- 求助！新人，融合PCR一直融不上�。�！
已經(jīng)有24人回復(fù)
- 求AS_PCR引物設(shè)計(jì)
已經(jīng)有4人回復(fù)
- 融合PCR請幫忙看看圖片吧
已經(jīng)有6人回復(fù)
- Touch Down PCR
已經(jīng)有17人回復(fù)
- 合成的引物直接退火形成粘性末端后連入載體
已經(jīng)有13人回復(fù)
- 如何避免引物二聚體
已經(jīng)有10人回復(fù)
- 3個(gè)片段的重疊延伸pcr,pcr反應(yīng)條件？
已經(jīng)有7人回復(fù)
- 重疊PCR引物，兩個(gè)片段分別回收后存在雜帶是怎么回事
已經(jīng)有4人回復(fù)
- 求關(guān)于Overlap PCR(重疊延伸PCR)的具體實(shí)驗(yàn)過程及原理
已經(jīng)有10人回復(fù)
- 求問一個(gè)問題，dNTP濃度過低是否在PCR反應(yīng)中就會(huì)形成引物二聚體 謝謝
已經(jīng)有5人回復(fù)
- 求助重疊延伸pcr
已經(jīng)有5人回復(fù)
- 3個(gè)片段的重疊pcr能否一步到位？
已經(jīng)有11人回復(fù)
- 關(guān)于融合PCR的問題
已經(jīng)有14人回復(fù)
- 合成一段DNA的問題？引物，PCR
已經(jīng)有13人回復(fù)
- 重疊延伸PCR設(shè)計(jì)引物
已經(jīng)有3人回復(fù)
- PCR最短可以P多少bp，求大家?guī)臀以O(shè)計(jì)引物！
已經(jīng)有7人回復(fù)
- 【求助/交流】引物合成
已經(jīng)有17人回復(fù)
- 【求助/交流】引物Tm值很高，PCR求助
已經(jīng)有17人回復(fù)
- 【求助/交流】qrt-pcr引物是否要純化
已經(jīng)有4人回復(fù)
- 【求助/交流】PCR延伸問題
已經(jīng)有12人回復(fù)
- 【求助/交流】PCR引物可否不用設(shè)計(jì)直接用參考文獻(xiàn)中的？
已經(jīng)有7人回復(fù)
lvbobo823
鐵桿木蟲 (正式寫手)
- BioEPI: 1
- 應(yīng)助: 363 (碩士)
- 金幣: 7753.3
- 散金: 15
- 紅花: 9
- 帖子: 751
- 在線: 189.4小時(shí)
- 蟲號(hào): 819723
- 注冊: 2009-07-31
- 性別: GG
- 專業(yè): 植物遺傳學(xué)
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
telomerase: 金幣+1, 謝謝你的熱心應(yīng)助 2012-03-24 20:36:38
小周: 金幣+5, ★★★很有幫助 2012-03-26 17:08:10
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
telomerase: 金幣+1, 謝謝你的熱心應(yīng)助 2012-03-24 20:36:38
小周: 金幣+5, ★★★很有幫助 2012-03-26 17:08:10
|
就是搭橋PCR。設(shè)計(jì)引物時(shí)A片段3‘端取20bp左右的堿基，B片段5’端取20個(gè)堿基左右，總堿基不要超過50bp（大于50公司合成會(huì)比較貴），同時(shí)合成該引物反向互補(bǔ)片段。 用這條引物跟B片段的反向引物擴(kuò)增B片段。再用這條引物反向互補(bǔ)序列為反向引物與A片段的正向引物擴(kuò)增A片段。 把上一步擴(kuò)增的A，B產(chǎn)物等摩爾混合再用A片段的正向引物與B片段的反向引物擴(kuò)增，跑膠，回收你需要的大小的片段。 |
5樓2012-03-24 16:16:08
| overlapPCR |
» 本帖附件資源列表
-
歡迎監(jiān)督和反饋：小木蟲僅提供交流平臺(tái)，不對(duì)該內(nèi)容負(fù)責(zé)。
本內(nèi)容由用戶自主發(fā)布，如果其內(nèi)容涉及到知識(shí)產(chǎn)權(quán)問題，其責(zé)任在于用戶本人，如對(duì)版權(quán)有異議，請聯(lián)系郵箱：xiaomuchong@tal.com - 附件 1 : 新建 Microsoft Office Word 文檔.docx
2012-03-25 21:18:04, 13.34 K
» 本帖已獲得的紅花（最新10朵）
小周9樓2012-03-25 21:18:16
顏英
銅蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 10 (幼兒園)
- 金幣: 9.3
- 散金: 14
- 帖子: 95
- 在線: 26.5小時(shí)
- 蟲號(hào): 1713517
- 注冊: 2012-03-24
- 專業(yè): 微生物生理與生物化學(xué)
2樓2012-03-24 13:17:14
小周
鐵桿木蟲 (著名寫手)
- BioEPI: 2
- 應(yīng)助: 42 (小學(xué)生)
- 金幣: 11329.6
- 散金: 20
- 紅花: 10
- 沙發(fā): 1
- 帖子: 1324
- 在線: 560.7小時(shí)
- 蟲號(hào): 688224
- 注冊: 2009-01-05
- 性別: MM
- 專業(yè): 抗體工程學(xué)
3樓2012-03-24 14:57:01
imyting
至尊木蟲 (正式寫手)
- BioEPI: 1
- 應(yīng)助: 66 (初中生)
- 金幣: 10216.2
- 散金: 658
- 紅花: 5
- 帖子: 805
- 在線: 167.6小時(shí)
- 蟲號(hào): 736362
- 注冊: 2009-03-31
- 性別: GG
- 專業(yè): 生物大分子結(jié)構(gòu)與功能
4樓2012-03-24 15:14:51
jinpeng_6118
木蟲 (正式寫手)
- BioEPI: 2
- 應(yīng)助: 28 (小學(xué)生)
- 金幣: 5027
- 散金: 25
- 紅花: 2
- 帖子: 856
- 在線: 147.9小時(shí)
- 蟲號(hào): 1019189
- 注冊: 2010-05-15
- 性別: GG
- 專業(yè): 微生物遺傳學(xué)
6樓2012-03-25 10:27:06
to-be
金蟲 (正式寫手)
- 應(yīng)助: 29 (小學(xué)生)
- 金幣: 898.5
- 散金: 277
- 帖子: 476
- 在線: 70.6小時(shí)
- 蟲號(hào): 254873
- 注冊: 2006-05-27
- 性別: MM
- 專業(yè): 神經(jīng)生物學(xué)
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
小周: 金幣+5, ★有幫助 2012-03-26 17:08:32
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
小周: 金幣+5, ★有幫助 2012-03-26 17:08:32
|
1.設(shè)計(jì)2對(duì)引物，A5‘ &3’ ；B5‘&3’；A3‘和B5’ 引物有大于15bp的overlap。 2. 分別擴(kuò)增A和B； 3.A和BPCR 產(chǎn)物等摩爾比混合，共同做模板，用A5‘和B3’擴(kuò)增。 4.如果擴(kuò)增效果不好，可以將A5‘和B3’ 向中間移動(dòng)20左右bp重新設(shè)計(jì)引物擴(kuò)增。 可以查看Overlap extension PCR |
7樓2012-03-25 14:58:23
生物一點(diǎn)點(diǎn)
新蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 2 (幼兒園)
- 金幣: 13.5
- 帖子: 4
- 在線: 1.1小時(shí)
- 蟲號(hào): 1715853
- 注冊: 2012-03-25
- 專業(yè): 人類遺傳學(xué)
8樓2012-03-25 19:22:06
小周
鐵桿木蟲 (著名寫手)
- BioEPI: 2
- 應(yīng)助: 42 (小學(xué)生)
- 金幣: 11329.6
- 散金: 20
- 紅花: 10
- 沙發(fā): 1
- 帖子: 1324
- 在線: 560.7小時(shí)
- 蟲號(hào): 688224
- 注冊: 2009-01-05
- 性別: MM
- 專業(yè): 抗體工程學(xué)
10樓2012-03-26 17:11:15
相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 小周 的主題更新
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 26調(diào)劑/材料/英一數(shù)二/總分289/已過A區(qū)線 +7 | 步川酷紫123 2026-03-13 | 7/350 |
|
|---|---|---|---|---|
|
|
[考研] 一志愿985，本科211，0817化學(xué)工程與技術(shù)319求調(diào)劑 +6 | Liwangman 2026-03-15 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 312求調(diào)劑 +8 | 陌宸希 2026-03-16 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 280求調(diào)劑 +6 | 咕嚕曉曉 2026-03-18 | 7/350 |
|
|
[考博] 環(huán)境領(lǐng)域全國重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室招收博士1-2名 +3 | QGZDSYS 2026-03-13 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 0703化學(xué)求調(diào)劑 總分331 +3 | ZY-05 2026-03-13 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 0703化學(xué)336分求調(diào)劑 +6 | zbzihdhd 2026-03-15 | 7/350 |
|
|
|
[論文投稿] 有沒有大佬發(fā)小論文能帶我個(gè)二作 +3 | 增銳漏人 2026-03-17 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 333求調(diào)劑 +3 | 文思客 2026-03-16 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 中科院材料273求調(diào)劑 +4 | yzydy 2026-03-15 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 288求調(diào)劑 +4 | 奇點(diǎn)0314 2026-03-14 | 4/200 |
|
|
|
[基金申請] 現(xiàn)在如何回避去年的某一個(gè)專家，不知道名字 +3 | zk200107 2026-03-12 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 328求調(diào)劑 +3 | 5201314Lsy！ 2026-03-13 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 一志愿哈工大材料324分求調(diào)劑 +5 | 閆旭東 2026-03-14 | 5/250 |
|
|
|
[碩博家園] 085600 260分求調(diào)劑 +3 | 天空還下雨么 2026-03-13 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 0703化學(xué)求調(diào)劑 +7 | 綠豆芹菜湯 2026-03-12 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑 +7 | 18880831720 2026-03-11 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 一志愿211化學(xué)學(xué)碩310分求調(diào)劑 +8 | 努力奮斗112 2026-03-12 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 070303一志愿西北大學(xué)學(xué)碩310找調(diào)劑 +3 | d如愿上岸 2026-03-13 | 3/150 |
|
|
|
[考博] 26讀博 +4 | Rui135246 2026-03-12 | 10/500 |
|