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小周

鐵桿木蟲(chóng) (著名寫(xiě)手)

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[求助] 重疊延伸PCR引物合成求助

最近想把兩個(gè)DNA片段連起來(lái)，想用SOE PCR的方法，看了半天引物設(shè)計(jì)時(shí)都沒(méi)有搞明白。
假設(shè)我的片段A序列為：5’CGA GGATCCAG CATG GAG ACA GAC ACA CTC CTG CTA TGG GTA CTG ........ ACT GGT GACCAT CAT CAC CAT CAC CAT3’

B片段的序列為：5’GACGATGACGACAAGccagtaccccc................agggctcttcggcaaatgtaaGTCGACCAGG3’

希望的結(jié)果為A在前B在后：
5’CGA GGATCCAG CATG GAG ACA GAC ACA CTC CTG CTA TGG GTA CTG ........ ACT GGT GACCAT CAT CAC CAT CACCATGACGATGACGACAAGccagtaccccc................agggctcttcggcaaatgtaaGTCGACCAGG3’
中間兩條引物該怎樣設(shè)計(jì)呢？謝謝

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1樓 2012-03-24 12:26:05

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生物一點(diǎn)點(diǎn)

新蟲(chóng) (初入文壇)

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小周

8樓2012-03-25 19:22:06

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顏英

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【答案】應(yīng)助回帖

★ ★
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小周: 金幣+2, ★有幫助 2012-03-26 17:07:52

引物的設(shè)計(jì)不是有軟件嗎？我的實(shí)驗(yàn)也需要設(shè)計(jì)引物，師姐推薦我用primer premier5這個(gè)軟件，因?yàn)槲业哪康幕蜻€沒(méi)確定，所以這個(gè)軟件我還沒(méi)用過(guò)，不知好不好用呵呵。。。

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2樓2012-03-24 13:17:14

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小周

鐵桿木蟲(chóng) (著名寫(xiě)手)

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引用回帖:

2樓: Originally posted by 顏英 at 2012-03-24 13:17:14:
引物的設(shè)計(jì)不是有軟件嗎？我的實(shí)驗(yàn)也需要設(shè)計(jì)引物，師姐推薦我用primer premier5這個(gè)軟件，因?yàn)槲业哪康幕蜻€沒(méi)確定，所以這個(gè)軟件我還沒(méi)用過(guò)，不知好不好用呵呵。。。

這個(gè)我知道，呵呵。連接片段稍微麻煩點(diǎn)。

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3樓2012-03-24 14:57:01

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imyting

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【答案】應(yīng)助回帖

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小周: 金幣+3, ★有幫助, 網(wǎng)上的例子也看了，我大概也知道應(yīng)該是樣子，腦子有點(diǎn)笨，具體怎么設(shè)計(jì)想不明白。 2012-03-24 15:40:45

取A序列的末端20個(gè)和B序列的前端20個(gè)，分別與A和B進(jìn)行PCR，再回收產(chǎn)物做模板進(jìn)行第二次PCR。我只是舉個(gè)例子，具體的引物你還得仔細(xì)分析一下。

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悠哉游哉做實(shí)驗(yàn)，成兮敗兮我隨便

4樓2012-03-24 15:14:51

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