 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 查看: 4316 | 回復(fù): 11 | ||
[求助]
3個(gè)片段的重疊pcr能否一步到位？
|
|
有三個(gè)片段，分別為330 150 250bp，兩個(gè)接頭都有20bp的重疊序列，想一次性拼起來。PCR時(shí)分步進(jìn)行，先是不加引物，單純擴(kuò)模板。希望得到三個(gè)片段正確連接的模板。然后加入第一個(gè)片段的上游引物和第三個(gè)片段的下游引物，做了好幾次了，之前都會(huì)出現(xiàn)250bp的條帶，又一次在目的條帶大小處有點(diǎn)模糊的亮區(qū)，但是比250bp處的條帶暗很多。最后一次什么條帶都沒了。 拼模板時(shí)的退火溫度試過55至40℃的梯度，和40到30℃的touchdown，都是10個(gè)循環(huán)，后面加入引物的擴(kuò)增試過50-68℃的梯度，都沒有能成功。我自己覺得問題主要處在3片段的模板沒有連出來。不知道有沒有人遇到過類似的情況？該怎么解決？ 關(guān)于出現(xiàn)250bp的非目的條帶，懷疑是單引物擴(kuò)增，引物第三個(gè)片段剛好也是250bp的樣子。不知道這種情況在不跟換引物的前提下還能不能做下去？ |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)中的趣事：實(shí)驗(yàn)器材的 “烏龍”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)中的趣事：和實(shí)驗(yàn)材料的 “斗智斗勇”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤(rùn)色/翻譯怎么收費(fèi)?
已經(jīng)有159人回復(fù)
-
蛋白質(zhì)檢測(cè)：精準(zhǔn)分析，解鎖生物分子的密碼
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之小鼠實(shí)驗(yàn)：嚴(yán)謹(jǐn)設(shè)計(jì)，解析生命機(jī)制的重要載體
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之重金屬檢測(cè)：精準(zhǔn)篩查，守護(hù)健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“蛙測(cè)重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標(biāo)南京
已經(jīng)有0人回復(fù)
» 本主題相關(guān)價(jià)值貼推薦，對(duì)您同樣有幫助:
- 嵌套PCR引物如何設(shè)計(jì)？目的片段434bp
已經(jīng)有6人回復(fù)
- 重疊延伸PCR引物合成求助
已經(jīng)有15人回復(fù)
- 醛轉(zhuǎn)化成氰基 能一步到位嗎
已經(jīng)有3人回復(fù)
- 大片段PCR擴(kuò)增求助
已經(jīng)有34人回復(fù)
- 高GC含量基因片段PCR問題
已經(jīng)有13人回復(fù)
- 重疊PCR應(yīng)該怎么做？
已經(jīng)有9人回復(fù)
- 基因組中長(zhǎng)片段PCR應(yīng)該注意的幾個(gè)問題
已經(jīng)有14人回復(fù)
- 重疊PCR克隆大片段
已經(jīng)有4人回復(fù)
- 重疊pcr\跳躍pcr的問題
已經(jīng)有14人回復(fù)
- 如何設(shè)計(jì)重疊延伸PCR引物
已經(jīng)有14人回復(fù)
- 【求助/交流】長(zhǎng)片段PCR
已經(jīng)有10人回復(fù)
- 【求助/交流】重疊PCR相關(guān)問題。
已經(jīng)有8人回復(fù)
- 【求助/交流】5500bp的片段PCR問題
已經(jīng)有21人回復(fù)
2樓2012-04-16 09:19:50
3樓2012-04-16 17:25:41
4樓2012-04-16 19:15:56
5樓2012-04-16 20:33:40
西瓜
榮譽(yù)版主 (知名作家)
- MolEPI: 50
- 應(yīng)助: 94 (初中生)
- 貴賓: 3.157
- 金幣: 1849.6
- 散金: 11458
- 紅花: 116
- 沙發(fā): 21
- 帖子: 7553
- 在線: 1449.5小時(shí)
- 蟲號(hào): 271749
- 注冊(cè): 2006-08-13
- 性別: GG
- 專業(yè): 細(xì)胞衰老
- 管轄: 分子生物
6樓2012-04-16 21:34:55
果子么么茶
木蟲 (著名寫手)
- 應(yīng)助: 38 (小學(xué)生)
- 金幣: 1722.5
- 散金: 1639
- 紅花: 9
- 沙發(fā): 1
- 帖子: 1313
- 在線: 373.5小時(shí)
- 蟲號(hào): 1430753
- 注冊(cè): 2011-10-07
- 性別: MM
- 專業(yè): 微生物生理與生物化學(xué)
7樓2012-04-16 22:27:58
8樓2012-04-16 23:05:18
9樓2012-04-16 23:06:20
chibang1220
木蟲 (著名寫手)
- 應(yīng)助: 42 (小學(xué)生)
- 金幣: 5697.7
- 散金: 68
- 紅花: 8
- 帖子: 1435
- 在線: 333.1小時(shí)
- 蟲號(hào): 1653055
- 注冊(cè): 2012-02-29
- 性別: GG
- 專業(yè): 生物物理、生物化學(xué)與分子
10樓2012-04-17 10:38:34
相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 hackett 的主題更新
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 268求調(diào)劑 +7 | 好運(yùn)連綿不絕 2026-03-12 | 8/400 |
|
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 考研化學(xué)學(xué)碩調(diào)劑，一志愿985 +4 | 張vvvv 2026-03-15 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 【0856】化學(xué)工程（085602）313 分，本科學(xué)科評(píng)估A類院校化學(xué)工程與工藝，誠(chéng)求調(diào)劑 +7 | 小劉快快上岸 2026-03-11 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 08工科 320總分 求調(diào)劑 +4 | 梨花珞晚風(fēng) 2026-03-17 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 211本，11408一志愿中科院277分，曾在中科院自動(dòng)化所實(shí)習(xí) +6 | Losir 2026-03-12 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 283求調(diào)劑 +3 | 聽風(fēng)就是雨； 2026-03-16 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 274求調(diào)劑 +5 | 時(shí)間點(diǎn) 2026-03-13 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 286求調(diào)劑 +3 | lemonzzn 2026-03-16 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 304求調(diào)劑 +4 | ahbd 2026-03-14 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 318求調(diào)劑 +3 | Yanyali 2026-03-15 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 304求調(diào)劑 +3 | 曼殊2266 2026-03-14 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 283求調(diào)劑 +10 | 小樓。 2026-03-12 | 14/700 |
|
|
|
[考研] 085600調(diào)劑 +5 | 漾漾123sun 2026-03-12 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 中科大材料與化工319求調(diào)劑 +3 | 孟鑫材料 2026-03-14 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 一志愿哈工大材料324分求調(diào)劑 +5 | 閆旭東 2026-03-14 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑（材料與化工327） +4 | 愛吃香菜啦 2026-03-11 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 336求調(diào)劑 +6 | Iuruoh 2026-03-11 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 工科調(diào)劑 +4 | Jiang191123！ 2026-03-11 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 材料301分求調(diào)劑 +5 | Liyouyumairs 2026-03-12 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 289求調(diào)劑 +3 | 李政瑩 2026-03-12 | 3/150 |
|