 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 查看: 4329 | 回復(fù): 11 | ||
[求助]
3個片段的重疊pcr能否一步到位？
|
|
有三個片段，分別為330 150 250bp，兩個接頭都有20bp的重疊序列，想一次性拼起來。PCR時分步進行，先是不加引物，單純擴模板。希望得到三個片段正確連接的模板。然后加入第一個片段的上游引物和第三個片段的下游引物，做了好幾次了，之前都會出現(xiàn)250bp的條帶，又一次在目的條帶大小處有點模糊的亮區(qū)，但是比250bp處的條帶暗很多。最后一次什么條帶都沒了。 拼模板時的退火溫度試過55至40℃的梯度，和40到30℃的touchdown，都是10個循環(huán)，后面加入引物的擴增試過50-68℃的梯度，都沒有能成功。我自己覺得問題主要處在3片段的模板沒有連出來。不知道有沒有人遇到過類似的情況？該怎么解決？ 關(guān)于出現(xiàn)250bp的非目的條帶，懷疑是單引物擴增，引物第三個片段剛好也是250bp的樣子。不知道這種情況在不跟換引物的前提下還能不能做下去？ |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
不合理蛙科研實驗中的趣事：實驗器材的 “烏龍”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗中的趣事：和實驗材料的 “斗智斗勇”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤色/翻譯怎么收費?
已經(jīng)有147人回復(fù)
-
蛋白質(zhì)檢測：精準(zhǔn)分析，解鎖生物分子的密碼
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗之小鼠實驗：嚴謹設(shè)計，解析生命機制的重要載體
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗之重金屬檢測：精準(zhǔn)篩查，守護健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗之“蛙測重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標(biāo)南京
已經(jīng)有0人回復(fù)
» 本主題相關(guān)價值貼推薦，對您同樣有幫助:
- 嵌套PCR引物如何設(shè)計？目的片段434bp
已經(jīng)有6人回復(fù)
- 重疊延伸PCR引物合成求助
已經(jīng)有15人回復(fù)
- 醛轉(zhuǎn)化成氰基 能一步到位嗎
已經(jīng)有3人回復(fù)
- 大片段PCR擴增求助
已經(jīng)有34人回復(fù)
- 高GC含量基因片段PCR問題
已經(jīng)有13人回復(fù)
- 重疊PCR應(yīng)該怎么做？
已經(jīng)有9人回復(fù)
- 基因組中長片段PCR應(yīng)該注意的幾個問題
已經(jīng)有14人回復(fù)
- 重疊PCR克隆大片段
已經(jīng)有4人回復(fù)
- 重疊pcr\跳躍pcr的問題
已經(jīng)有14人回復(fù)
- 如何設(shè)計重疊延伸PCR引物
已經(jīng)有14人回復(fù)
- 【求助/交流】長片段PCR
已經(jīng)有10人回復(fù)
- 【求助/交流】重疊PCR相關(guān)問題。
已經(jīng)有8人回復(fù)
- 【求助/交流】5500bp的片段PCR問題
已經(jīng)有21人回復(fù)
2樓2012-04-16 09:19:50
3樓2012-04-16 17:25:41
4樓2012-04-16 19:15:56
5樓2012-04-16 20:33:40
西瓜
榮譽版主 (知名作家)
- MolEPI: 50
- 應(yīng)助: 94 (初中生)
- 貴賓: 3.157
- 金幣: 1849.6
- 散金: 11458
- 紅花: 116
- 沙發(fā): 21
- 帖子: 7553
- 在線: 1449.5小時
- 蟲號: 271749
- 注冊: 2006-08-13
- 性別: GG
- 專業(yè): 細胞衰老
- 管轄: 分子生物
6樓2012-04-16 21:34:55
果子么么茶
木蟲 (著名寫手)
- 應(yīng)助: 38 (小學(xué)生)
- 金幣: 1722.5
- 散金: 1639
- 紅花: 9
- 沙發(fā): 1
- 帖子: 1313
- 在線: 373.5小時
- 蟲號: 1430753
- 注冊: 2011-10-07
- 性別: MM
- 專業(yè): 微生物生理與生物化學(xué)
7樓2012-04-16 22:27:58
8樓2012-04-16 23:05:18
9樓2012-04-16 23:06:20
chibang1220
木蟲 (著名寫手)
- 應(yīng)助: 42 (小學(xué)生)
- 金幣: 5697.7
- 散金: 68
- 紅花: 8
- 帖子: 1435
- 在線: 333.1小時
- 蟲號: 1653055
- 注冊: 2012-02-29
- 性別: GG
- 專業(yè): 生物物理、生物化學(xué)與分子
10樓2012-04-17 10:38:34
相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 hackett 的主題更新
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 【考研調(diào)劑】化學(xué)專業(yè) 281分，一志愿四川大學(xué)，誠心求調(diào)劑 +4 | 吃吃吃才有意義 2026-03-19 | 4/200 |
|
|---|---|---|---|---|
|
|
[考研] 一志愿福大288有機化學(xué)，求調(diào)劑 +3 | 小木蟲200408204 2026-03-18 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 085601材料工程專碩求調(diào)劑 +8 | 慕寒mio 2026-03-16 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 一志愿武漢理工材料工程專碩調(diào)劑 +3 | Doleres 2026-03-19 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 328求調(diào)劑，英語六級551，有科研經(jīng)歷 +4 | 生物工程調(diào)劑 2026-03-16 | 12/600 |
|
|
[考研] 267一志愿南京工業(yè)大學(xué)0817化工求調(diào)劑 +10 | SUICHILD 2026-03-12 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 材料工程專碩調(diào)劑 +5 | 204818@lcx 2026-03-17 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 070300化學(xué)319求調(diào)劑 +6 | 錦鯉0909 2026-03-17 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 304求調(diào)劑 +12 | 小熊joy 2026-03-14 | 13/650 |
|
|
|
[考研] 0703化學(xué)調(diào)劑 +4 | pupcoco 2026-03-17 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 303求調(diào)劑 +4 | 睿08 2026-03-17 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 工科材料085601 279求調(diào)劑 +6 | 困于星晨 2026-03-17 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 085601求調(diào)劑 +4 | Du.11 2026-03-16 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 有沒有道鐵/土木的想調(diào)劑南林，給自己招師弟中～ +3 | TqlXswl 2026-03-16 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 材料工程專碩274一志愿211求調(diào)劑 +6 | 薛云鵬 2026-03-15 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 275求調(diào)劑 +4 | 太陽花天天開心 2026-03-16 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 中科院材料273求調(diào)劑 +4 | yzydy 2026-03-15 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 311求調(diào)劑 +3 | 冬十三 2026-03-13 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 085600材料與化工 309分請求調(diào)劑 +7 | dtdxzxx 2026-03-12 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 321求調(diào)劑（食品/專碩） +3 | mxcz321 2026-03-12 | 6/300 |
|