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小牛石刀新蟲(chóng) (初入文壇)
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[求助]
RNA提取，怎么老是降解？求指導(dǎo)�。� 已有6人參與
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最近在提取植物（苜蓿）RNA，用的是博邁德的RNA提取試劑盒，多次提取經(jīng)過(guò)瓊膠電泳，條帶都很彌散，降解的厲害，求助原因！ 槍頭、離心管都是進(jìn)口的； 4度離心； |
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biostar2009
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用agarose gel判斷total RNA的完整性，最重要的指標(biāo)是條帶的完整性，也就是說(shuō)，在28S 18S之間，兩者的上下方，有沒(méi)有彌散性的條帶，注意是彌散性而不是很sharp的條帶，因?yàn)檫@個(gè)取決于你的上樣量，你要是跑10μg甚至更多的total RNA，這些地方就能看見(jiàn)其他的sharp 條帶。一般而言上500 ng足矣。 因?yàn)橐话闩躷otal RNA不會(huì)用很高濃度的膠，1.5%最高了，所以5S和tRNA經(jīng)常是一個(gè)smear狀的，1%左右的時(shí)候無(wú)法區(qū)分5S和tRNA，高一點(diǎn)還可以看見(jiàn)5S下方還有一個(gè)彌散性的tRNA。這些小RNA因?yàn)槭莝mear狀的，所以經(jīng)常顯得亮一些。 最后，如果你是跑的EB膠先加到agarose里面的，要注意多跑一會(huì)，這個(gè)經(jīng)常出現(xiàn)，不單單是total RNA，個(gè)人理解是這些較大的條帶還沒(méi)有充分吸收EB，如果你就跑一會(huì)會(huì)，肯定是最小的最亮。 |
20樓2014-03-28 07:55:44
wanjunfei153
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7樓2014-03-27 12:38:32
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只要你不往管子里吐口水，RNA幾乎不會(huì)降解，我抽的RNA經(jīng)常桌上放好幾天放忘了，拿去測(cè)序還是好好的。我們的槍頭都是實(shí)驗(yàn)室大叔徒手抓進(jìn)盒子的，雖說(shuō)也是進(jìn)口的散裝的。 如果你用的試劑，實(shí)驗(yàn)室其余人搞得好，只有在你這才出問(wèn)題，那么你首先看看你的材料有沒(méi)有問(wèn)題，比如細(xì)胞，是不是已經(jīng)半死不活了，這種細(xì)胞RNA已經(jīng)開(kāi)始降解了。 然后你檢測(cè)RNA跑得膠，有沒(méi)有問(wèn)題，要是別人有確認(rèn)好的樣品你可以帶上一個(gè)。 |
6樓2014-03-27 09:40:12
biostar2009
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