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yongxiu2008木蟲 (職業(yè)作家)
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[交流]
做過二甲苯致小鼠耳腫脹的蟲友們請進(jìn)! 已有2人參與
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想了解一下這個實(shí)驗(yàn)需要注意些什么? 二甲苯的刺激量是多少呢? |
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你好!我現(xiàn)在要做耳腫脹試驗(yàn),小白一枚,有幾個問題想請教一下。1、首先是二甲苯劑量問題。關(guān)于這個我看了很多文獻(xiàn)劑量不一,最低20微升,高的有幾百微升的,因此我做了一個小測試,發(fā)現(xiàn)20微升的二甲苯很快就致腫脹了,40微升的就有一些嚴(yán)重了,反而會導(dǎo)致左耳也有腫脹,因此我就選定的是20微升。2、其次是時間間隔問題?次墨I(xiàn)從涂抹二甲苯到處死小鼠的時間間隔有30分鐘到1小時不等,但我用二甲苯20微升很快小鼠耳朵就紅腫,間隔也就2分鐘左右。3、在以上基礎(chǔ),我做一次預(yù)實(shí)驗(yàn),結(jié)果很奇怪陽性對照組反而出現(xiàn)的是陰性結(jié)果,樣品組數(shù)據(jù)也不穩(wěn)定。所以想在這個二甲苯劑量與時間間隔這方便請教一下,不知是否方便可以詳細(xì)介紹一下這方面的選擇。 |
金蟲 (小有名氣)
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做過。有文獻(xiàn)說用移液器吸取少量的二甲苯滴在小鼠耳廓上讓其慢慢擴(kuò)散,我們自己在做的時候發(fā)現(xiàn)這樣做出來腫脹度不好且模型不穩(wěn)定。 1、后面用移液器吸取0.05ml的二甲苯,用移液器的針頭輕輕涂抹小鼠右耳朵正反面,這樣會比文獻(xiàn)上面的好點(diǎn)。 2、涂完二甲苯小鼠要放在沒加墊料的籠子里面,不然小鼠會把耳朵往墊料上面蹭。 3、還有一點(diǎn)要注意的是涂完后小鼠不要放在空調(diào)房里,溫度比較低這點(diǎn)很影響它的腫脹度,一般30~40分鐘可達(dá)到最大腫脹度,超過90分鐘腫脹消失,所以要在這個時間打打孔稱重。 4、有三種種方法,有的是整個耳朵減下來稱重,有的是耳朵減下來然后用6~8mm的打孔器稱重,有的是不剪耳朵直接打孔稱重。我用的是第二種方法,做出來數(shù)據(jù)還可以。 5、考慮你要做的實(shí)驗(yàn)來選擇不同的致炎物質(zhì)。二甲苯模型主要機(jī)制是致使某些炎癥介質(zhì)如組胺、激肽和纖維蛋白溶解釋放,引起局部血管擴(kuò)張,毛細(xì)管通透性增加,炎癥細(xì)胞浸潤,造成耳部急性滲出性炎癥水腫。佛波酯誘導(dǎo)的小鼠耳腫脹模型的主要機(jī)能誘導(dǎo)小鼠耳組織角質(zhì)形成細(xì)胞產(chǎn)生TNF-α,IL-1β等炎癥細(xì)胞因子。另外TNF-α的存在會促進(jìn)繼發(fā)性炎癥細(xì)胞因子生成,促使炎性反應(yīng)進(jìn)一步擴(kuò)大。刺激磷脂酶誘導(dǎo)AA釋放,代謝成為前列腺素E2(PGE2)和白三烯LTB4,加重炎癥。促進(jìn)組胺和5-羥色胺的釋放。花生四烯酸誘導(dǎo)小鼠耳腫脹的機(jī)制主要為白三烯和其他脂肪氧化酶介導(dǎo),而在白三烯存在的情況下前列腺素會促進(jìn)小鼠耳腫脹。 辣椒素誘導(dǎo)的小鼠耳水腫的形成主要由神經(jīng)肽介導(dǎo),如降鈣素基因相關(guān)肽、P物質(zhì)、神經(jīng)激肽A和血管活性腸肽。 希望對你有幫助。 |

木蟲 (職業(yè)作家)
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請問是涂抹多長時間之后開始處死的?還有你們這是二甲苯量和時間是怎么確定的?是看參考文獻(xiàn),還是做了有預(yù)實(shí)驗(yàn)?zāi)?感謝您的回復(fù) 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
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