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刪除幾個核苷酸用質粒擴增誘變可以嗎？ 已有3人參與
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我看到質粒擴增誘變基本是做把一個點變成另一個，我想要刪掉幾個核苷酸，也就編碼4~5個氨基酸的長度，是不是引物設計的時候去掉就可以了，還是以刪除的位點為中心設計引物嗎？ 除了這個方法，還有什么簡單的方法可以做到定點除去一個片段？ |
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2樓2014-04-01 16:51:56
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lihe131
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4樓2014-04-01 23:31:19
lvbobo823
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5樓2014-04-02 08:47:20
【答案】應助回帖
★ ★ ★
感謝參與，應助指數(shù) +1
天湖酒(西門吹雪170代發(fā)): 金幣+3, 鼓勵回帖交流 2014-04-02 09:46:23
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天湖酒(西門吹雪170代發(fā)): 金幣+3, 鼓勵回帖交流 2014-04-02 09:46:23
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看你的回復，應該是在用基于甲基化降解(DpnI)的突變試劑盒 這種試劑盒設計引物的時候要完全互補，擴展之后加入DpnI，降解模板 你注意看一下說明書吧，刪除堿基的引物設計應該也是把刪除的片段置于引物中間 不過一次4-5個堿基會造成突變效率下降的 還有一類突變試劑盒是PCR后再連接的，引物設計是鄰接的，連接之后是一個完整的質粒。 這樣的試劑盒，做刪除突變就比較容易，而且也沒有堿基長度的限制，不過要求引物合成的時候5‘磷酸化 同時需要有一個能擴增長片段的高保真酶 如果沒有試劑盒，也沒有能擴增長片段的高保真酶，那么你可以在要刪除位點附近，尋找單酶切位點，然后像做重組克隆一樣，把質粒雙酶切，然后再連入刪除了堿基的序列（這個可能要用到OverlapPCR） |
6樓2014-04-02 09:37:43
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