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zrz_23

新蟲 (初入文壇)

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[求助] 免疫共沉淀誘餌蛋白不表達(dá) 已有1人參與

之前用酵母雙雜交進(jìn)行篩選是正常表達(dá)的，接著用免疫共沉淀驗證的時候誘餌蛋白居然沒有表達(dá)，而且目的蛋白也有兩個沒表達(dá)，用的是最常用的293細(xì)胞，求助各位高人幫忙分析下原因。

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1樓 2014-04-02 10:47:08

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d00614028

銀蟲 (小有名氣)

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【答案】應(yīng)助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
silicare: 金幣+5, BioEPI+1, 謝謝參與 2014-04-02 15:22:05

酵母雙雜相當(dāng)于是在體外研究蛋白之間的相互作用，你是把基因連接到雙雜的載體中，用高表達(dá)量的啟動子來啟動prey 和Bait的表達(dá)，用的并不是蛋白本身的啟動子；而免疫共沉淀相當(dāng)于在體內(nèi)研究蛋白之間的相互作用，這個用的是自身的啟動子。所以你雙雜能檢測到相互作用，免疫共沉淀酶檢測到表達(dá)也正常的額，你最好先用相應(yīng)的抗體檢測下相關(guān)蛋白的表達(dá)，提高上樣量，帶上Actin的對照，看你這幾個蛋白在細(xì)胞中的表達(dá)怎么樣，然后再嘗試IP哦。

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