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zrz_23新蟲 (初入文壇)
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[求助]
免疫共沉淀誘餌蛋白不表達(dá) 已有1人參與
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| 之前用酵母雙雜交進(jìn)行篩選是正常表達(dá)的，接著用免疫共沉淀驗(yàn)證的時(shí)候誘餌蛋白居然沒(méi)有表達(dá)，而且目的蛋白也有兩個(gè)沒(méi)表達(dá)，用的是最常用的293細(xì)胞，求助各位高人幫忙分析下原因。 |
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d00614028
銀蟲 (小有名氣)
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【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
silicare: 金幣+5, BioEPI+1, 謝謝參與 2014-04-02 15:22:05
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silicare: 金幣+5, BioEPI+1, 謝謝參與 2014-04-02 15:22:05
| 酵母雙雜相當(dāng)于是在體外研究蛋白之間的相互作用，你是把基因連接到雙雜的載體中，用高表達(dá)量的啟動(dòng)子來(lái)啟動(dòng)prey 和Bait的表達(dá)，用的并不是蛋白本身的啟動(dòng)子；而免疫共沉淀相當(dāng)于在體內(nèi)研究蛋白之間的相互作用，這個(gè)用的是自身的啟動(dòng)子。所以你雙雜能檢測(cè)到相互作用，免疫共沉淀酶檢測(cè)到表達(dá)也正常的額，你最好先用相應(yīng)的抗體檢測(cè)下相關(guān)蛋白的表達(dá)，提高上樣量，帶上Actin的對(duì)照，看你這幾個(gè)蛋白在細(xì)胞中的表達(dá)怎么樣，然后再嘗試IP哦。 |
2樓2014-04-02 13:27:13
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