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zrz_23新蟲 (初入文壇)
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[求助]
免疫共沉淀誘餌蛋白不表達 已有1人參與
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| 之前用酵母雙雜交進行篩選是正常表達的，接著用免疫共沉淀驗證的時候誘餌蛋白居然沒有表達，而且目的蛋白也有兩個沒表達，用的是最常用的293細胞，求助各位高人幫忙分析下原因。 |
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d00614028
銀蟲 (小有名氣)
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【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
silicare: 金幣+5, BioEPI+1, 謝謝參與 2014-04-02 15:22:05
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
silicare: 金幣+5, BioEPI+1, 謝謝參與 2014-04-02 15:22:05
| 酵母雙雜相當于是在體外研究蛋白之間的相互作用，你是把基因連接到雙雜的載體中，用高表達量的啟動子來啟動prey 和Bait的表達，用的并不是蛋白本身的啟動子；而免疫共沉淀相當于在體內(nèi)研究蛋白之間的相互作用，這個用的是自身的啟動子。所以你雙雜能檢測到相互作用，免疫共沉淀酶檢測到表達也正常的額，你最好先用相應(yīng)的抗體檢測下相關(guān)蛋白的表達，提高上樣量，帶上Actin的對照，看你這幾個蛋白在細胞中的表達怎么樣，然后再嘗試IP哦。 |
2樓2014-04-02 13:27:13
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