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拉風(fēng)蝸牛王金蟲 (正式寫手)
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[求助]
考馬斯亮藍(lán)G250測(cè)蛋白濃度問題 已有2人參與
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首先是我的實(shí)驗(yàn)方法： 考馬斯亮藍(lán)配制：稱取考馬斯亮藍(lán)G-250 100 mg溶于50 mL95%的乙醇中，然后加入85%的磷酸100 mL，用蒸餾水定容至1L。 檢測(cè)：待測(cè)液40UL+考馬斯亮藍(lán)溶液200UL，5分鐘后 595nm下測(cè)吸光值。 實(shí)驗(yàn)中出現(xiàn)的問題： 1 我配出來的考馬斯亮藍(lán)是青綠色的，而參考資料上說是棕紅色的。 2 我用BSA做標(biāo)曲時(shí)發(fā)現(xiàn)線性范圍（R2>0.99）只限于25ug/ml-100ug/ml (是指加入的40UL的蛋白濃度)。這個(gè)范圍是不是過于小了��？是因?yàn)槲遗涞目捡R斯亮藍(lán)溶液有問題導(dǎo)致的嗎？特別是蛋白濃度在25ug/ml以下時(shí)的吸光值和空白基本是一樣的！ 3 檢測(cè)的時(shí)候發(fā)現(xiàn)反應(yīng)液中出現(xiàn)藍(lán)色的顆粒物。之后形成絮狀沉淀沉于底部。我的考馬斯亮藍(lán)溶液是現(xiàn)配的，應(yīng)該不是變質(zhì)的問題。 求解決以上問題。 求各位有經(jīng)驗(yàn)的大神幫幫小弟，小弟在這里先謝謝了�。�！ |
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vs570588
木蟲 (正式寫手)
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2樓2014-04-02 23:33:14
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3樓2014-04-04 13:40:02
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