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bjgymilyxz木蟲 (小有名氣)
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[求助]
免疫熒光目的蛋白定位異常 已有1人參與
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各位親，本人最近做細(xì)胞爬片的免疫熒光染色，得到了如下圖片，但是不知道為什么目的蛋白定位異常，請教各位大蝦。我養(yǎng)的前體脂肪細(xì)胞，梭形的，一抗是abcam的兔抗人的多抗，二抗分別是Alexa 488標(biāo)記的綠色。檢測的目的蛋白應(yīng)該定位在細(xì)胞質(zhì)，但是，我的前后2次染色結(jié)果不同，一次是大部分定位于細(xì)胞質(zhì)，后一次則大部分出現(xiàn)在細(xì)胞核，不知道哪里出了問題，請給我賜教！！ 具體染色步驟：1. 3.7% 多聚甲醛 15min; 2. 0.1% Trion-X 10min; 3. 10% Normal Serum 30 min, 4. 1抗 4度 14-16 h; 5. 2抗 室溫 1 h; 6. Hoechst 10min 第1張圖片目的蛋白的綠色熒光出現(xiàn)在細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核，以胞核為主；第2張圖片的目的蛋白以胞漿為主。 為什么同一個蛋白在同一種細(xì)胞中做出的熒光結(jié)果，有的是以胞核為主，而有的又是以胞漿為主呢，abcam的說明書顯示目的蛋白定位于細(xì)胞質(zhì)的。 這張目的蛋白的綠色熒光出現(xiàn)在細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核，以胞核為主 后面這張圖片的目的蛋白以胞漿為主。 |
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d00614028
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bjgymilyxz
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