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小木蟲論壇-學術科研互動平臺 » 生物醫(yī)藥區(qū) » 分子生物 » DNA重組 » 求助：酶切的疑惑
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鬼羽帝魂木蟲 (著名寫手)
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求助：酶切的疑惑 已有3人參與
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最近做酶切，老是切不好，求幫助。 （1）回收不到東西：圖1是回收之前的帶。圖2是回收之后的帶，已經彌散。 （2）做轉化鑒定，發(fā)現(xiàn)原來質粒未酶切完全。但是回收后的條帶有稍微的彌散，這是什么原因？如圖3. （3）圖4中圓圈指示的區(qū)域是什么？是彌散的還是。。。。？？ 望解答。急求。 圖1 圖2 圖3 圖4 |
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Neo2000
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8樓2014-04-07 15:42:56
d00614028
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【答案】應助回帖
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1. 回收不到東西： 看看你的TAE的pH值是否正確，我們實驗室曾經有一次TAE 的PH值不正確導致回收不了DNA。另外你膠回收的洗脫液用的是什么，是水么？洗脫液的PH好像要在8左右，保持堿性，要不然洗脫不下來。 2. 未酶切完全，回收回來的可能就有質粒，你那彌散可能就是質粒。 3. 你圈的東西是不是因為跑膠的問題導致的呢，看你膠配的不是很好，另外，給個建議，不要用這么大的孔來跑，我覺得這樣會導致彌散嚴重，建議用正常的膠回收孔來跑（個人建議）。 希望對你有幫助。 |
2樓2014-04-05 10:01:41
鬼羽帝魂
木蟲 (著名寫手)
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3樓2014-04-05 10:19:57
d00614028
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4樓2014-04-05 10:56:31
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