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LAMME5

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[求助] 克隆表達(dá)基因大小不對(duì)了怎么回事？已有2人參與

最近做克隆表達(dá)，先克隆出枯草芽孢桿菌一段基因，連pMA5質(zhì)粒，先轉(zhuǎn)大腸桿菌JM109，酶切驗(yàn)證和PCR驗(yàn)證大小正確，保藏菌種。但是過(guò)了一段時(shí)間后，重新活化菌種，提質(zhì)粒，發(fā)現(xiàn)酶切和PCR驗(yàn)證大小都不對(duì)，基因變小了這是怎么回事呢最近很郁悶的啊擔(dān)心是染菌了劃線挑單菌落還是不對(duì) 到底是什么原因的呢求大神指導(dǎo)一下啊謝謝

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1樓 2014-04-08 08:47:24

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LAMME5

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3樓: Originally posted by LAMME5 at 2014-04-08 11:25:44
甘油凍管保藏的啊保藏半個(gè)月左右的啊我劃線挑出單菌落的啊還是不對(duì) 應(yīng)該不是染菌造成...

有沒(méi)有人遇到過(guò)類(lèi)似的情況的啊出來(lái)交流交流啊

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4樓2014-04-08 18:36:20

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cs2951819

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LAMME5: 金幣+4 2014-04-10 16:00:27

第一，同學(xué)，你是怎么保藏菌種的？甘油管？第二，保藏了多久？如果保藏時(shí)間過(guò)久，是有可能丟失的，第三，不太可能質(zhì)粒上片段變小，一般都是質(zhì)粒直接丟失？考慮是不是染菌

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2樓2014-04-08 09:05:33

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引用回帖:

2樓: Originally posted by cs2951819 at 2014-04-08 09:05:33
第一，同學(xué)，你是怎么保藏菌種的？甘油管？第二，保藏了多久？如果保藏時(shí)間過(guò)久，是有可能丟失的，第三，不太可能質(zhì)粒上片段變小，一般都是質(zhì)粒直接丟失？考慮是不是染菌
...

甘油凍管保藏的啊保藏半個(gè)月左右的啊我劃線挑出單菌落的啊還是不對(duì) 應(yīng)該不是染菌造成

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3樓2014-04-08 11:25:44

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Neo2000

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LAMME5: 金幣+4, ★★★很有幫助 2014-04-10 16:00:18

引用回帖:

4樓: Originally posted by LAMME5 at 2014-04-08 18:36:20
有沒(méi)有人遇到過(guò)類(lèi)似的情況的啊出來(lái)交流交流啊...

何必在這浪費(fèi)時(shí)間呢，重新做得了，一般情況下，除了甘油菌保存，還可以留點(diǎn)質(zhì)粒樣品，不至于遇到你這樣的麻煩事啊

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5樓2014-04-08 20:14:41

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