 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 4 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 1463 | 回復(fù): 3 | ||
星河鷺起金蟲 (初入文壇)
|
[求助]
提蛋白遇到瓶頸了，實(shí)驗(yàn)沒法繼續(xù)，各位大俠幫幫忙，一起找一下原因，有考染和銀染圖 已有1人參與
|
|
最近提蛋白，考染后目的條帶范圍內(nèi)（20KD-50KD）一直沒有條帶，懷疑有降解，但PMSF才買不久，用的時(shí)候也很注意，但就是結(jié)果不得。我提蛋白的基本步驟是： 1、吸去培養(yǎng)液，然后靜置一會(huì)兒使殘余培養(yǎng)液流到瓶底后再用移液器將其吸走。 2、每瓶細(xì)胞加3ml 4℃預(yù)冷的PBS，平放輕輕搖動(dòng)洗滌細(xì)胞，然后棄去洗液。重復(fù)以上操作兩次，共洗細(xì)胞三次以洗去培養(yǎng)液，將PBS棄凈后把培養(yǎng)瓶置于冰上。 3、按1ml裂解液（RIPA強(qiáng)，碧云天）加10 μl PMSF（100mM）的比例，配好裂解液搖勻置于冰上。（PMSF要搖勻至無結(jié)晶時(shí)才可與裂解液混合。） 4、每瓶細(xì)胞加400μl 含PMSF的裂解液，先于冰上裂解10min，為使細(xì)胞充分裂解培養(yǎng)瓶要經(jīng)常來回?fù)u動(dòng)。 5、用干凈的刮棒將細(xì)胞刮于培養(yǎng)瓶的一側(cè)（動(dòng)作要快），然后冰上繼續(xù)裂解20min,然后用槍將細(xì)胞碎片和裂解液移至1.5ml離心管中。（整個(gè)操作盡量在冰上進(jìn)行） 6、超聲三次，每次持續(xù)10S。（注意控制功率在20%--30%之間） 7、于4℃下12000rpm離心10min。（提前開離心機(jī)預(yù)冷）。 8、將離心后的上清分裝轉(zhuǎn)移到1.5ml的離心管中放于－80℃保存 求助各位大俠幫忙分析分析，找找原因。 |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
一志愿070300浙大化學(xué)358分，求調(diào)劑！
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
一志愿中南大學(xué)化學(xué)學(xué)碩0703總分337求調(diào)劑
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
一志愿北京化工大學(xué) 070300 學(xué)碩 336分 求調(diào)劑
已經(jīng)有5人回復(fù)
-
323求調(diào)劑
已經(jīng)有6人回復(fù)
-
352求調(diào)劑
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
一志愿東華大學(xué)化學(xué)070300，求調(diào)劑
已經(jīng)有8人回復(fù)
-
277材料科學(xué)與工程080500求調(diào)劑
已經(jīng)有7人回復(fù)
-
317求調(diào)劑
已經(jīng)有18人回復(fù)
-
293求調(diào)劑
已經(jīng)有5人回復(fù)
-
280分求調(diào)劑 一志愿085802
已經(jīng)有7人回復(fù)
» 本主題相關(guān)價(jià)值貼推薦，對您同樣有幫助:
- 哪位大俠做過太子參多糖水提的，幫幫忙吧，我都快做暈了，謝謝謝謝
已經(jīng)有10人回復(fù)
- DGGE 垂直電泳 灌膠技術(shù) 各位大俠幫幫忙
已經(jīng)有13人回復(fù)
- 急需，請各位大俠幫幫忙找個(gè)圖
已經(jīng)有10人回復(fù)
- 各位大俠，幫幫忙
已經(jīng)有19人回復(fù)
- 各位大俠幫幫忙，關(guān)于用線粒體DNA探討群體起源的sci投稿雜志有哪些，很急啊！
已經(jīng)有8人回復(fù)
- 求助！求助！ 齊墩果酸和熊果酸分不開!各位大俠幫幫忙�。�
已經(jīng)有8人回復(fù)
- 體心四方用XRD測織構(gòu)，需要選取哪些方向的的極圖，急急啊，各位大俠幫幫忙
已經(jīng)有4人回復(fù)
- 苯甲腈怎么除水呢？急求，各位大俠幫幫忙
已經(jīng)有3人回復(fù)
- 急求！羧酸合成酰胺的簡單方法，各位大俠幫忙
已經(jīng)有17人回復(fù)
- 各位大俠，幫忙看一下這個(gè)氧化鋁的吸附解吸曲線滯后環(huán)是什么型的啊，孔型咋樣啊~~謝謝
已經(jīng)有12人回復(fù)
- 想獲得較大量的pBR322，卻怎么也提不出來，各位大俠幫幫忙……
已經(jīng)有11人回復(fù)
- 怎么用matlab畫極坐標(biāo)三維圖？各位大俠幫幫忙��！
已經(jīng)有5人回復(fù)
- 面試：需試講食品安全方面的課件8分鐘，請各位大俠幫幫忙有沒有這方面的資源，謝謝了
已經(jīng)有16人回復(fù)
- 半路出家，遇到這個(gè)交流阻抗譜不知道怎么分析，還請各位大俠幫忙看看。
已經(jīng)有13人回復(fù)
- 咪唑洗下來的蛋白，如何更換成另一種緩沖液，請大俠幫忙
已經(jīng)有8人回復(fù)
- 那位大俠幫幫忙，總結(jié)一下最近這兩輛發(fā)生的食品安全事件��？
已經(jīng)有15人回復(fù)
- 這算不算學(xué)術(shù)論文一稿多投（各位大俠幫幫忙分析一下，金幣很少，幫幫忙啊）
已經(jīng)有8人回復(fù)
- 【求助/交流】vector 安裝不了怎么回事��？各位大俠幫幫忙啊
已經(jīng)有3人回復(fù)
- 【求助】請問怎么化簡？想把這個(gè)化成一個(gè)相對簡單的函數(shù)形式，求各位大俠幫忙！謝謝！
已經(jīng)有6人回復(fù)
- 【求助】請教各位大俠，有沒有專用的經(jīng)緯度轉(zhuǎn)換工具（度分秒——〉十進(jìn)制）
已經(jīng)有13人回復(fù)
星河鷺起
金蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 760.5
- 帖子: 29
- 在線: 137.2小時(shí)
- 蟲號: 1974701
- 注冊: 2012-09-04
- 專業(yè): 有機(jī)高分子功能材料
2樓2014-04-21 23:58:01
daibingling
鐵蟲 (正式寫手)
- 應(yīng)助: 120 (高中生)
- 金幣: 927.7
- 散金: 200
- 紅花: 5
- 帖子: 406
- 在線: 110.6小時(shí)
- 蟲號: 2116850
- 注冊: 2012-11-09
- 專業(yè): 藥物分析
3樓2014-04-22 15:57:38
星河鷺起
金蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 760.5
- 帖子: 29
- 在線: 137.2小時(shí)
- 蟲號: 1974701
- 注冊: 2012-09-04
- 專業(yè): 有機(jī)高分子功能材料
4樓2014-05-08 23:47:42
相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 星河鷺起 的主題更新
| 4 | 1/1 | 返回列表 |
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研]
 一志愿070300浙大化學(xué)358分，求調(diào)劑！
+4
|
酥酥魚.. 2026-03-21 | 4/200 |
|
|---|---|---|---|---|
|
|
[考研] 298求調(diào)劑 +6 | 上岸6666@ 2026-03-20 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 307求調(diào)劑 +11 | 冷笙123 2026-03-17 | 11/550 |
|
|
[考研] 08工科 320總分 求調(diào)劑 +11 | 梨花珞晚風(fēng) 2026-03-17 | 11/550 |
|
|
|
[考研] 287求調(diào)劑 +8 | 晨昏線與星海 2026-03-19 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 306求調(diào)劑 +5 | 來好運(yùn)來來來 2026-03-22 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 289求調(diào)劑 +7 | 懷瑾握瑜l 2026-03-20 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 286分人工智能專業(yè)請求調(diào)劑愿意跨考！ +4 | lemonzzn 2026-03-17 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 【考研調(diào)劑】化學(xué)專業(yè) 281分，一志愿四川大學(xué)，誠心求調(diào)劑 +11 | 吃吃吃才有意義 2026-03-19 | 11/550 |
|
|
|
[考研] 306求0703調(diào)劑一志愿華中師范 +5 | 紙魚ly 2026-03-21 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 266求調(diào)劑 +3 | 哇呼哼呼哼 2026-03-20 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 265求調(diào)劑 +12 | 梁梁校校 2026-03-19 | 14/700 |
|
|
|
[考研] 279分求調(diào)劑 一志愿211 +14 | chaojifeixia 2026-03-19 | 15/750 |
|
|
|
[考研] 295求調(diào)劑 +4 | 一志愿京區(qū)211 2026-03-18 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 一志愿 西北大學(xué) ，070300化學(xué)學(xué)碩，總分287，雙非一本，求調(diào)劑。 +4 | 晨昏線與星海 2026-03-19 | 4/200 |
|
|
|
[論文投稿]
申請回稿延期一個(gè)月，編輯同意了。但系統(tǒng)上的時(shí)間沒變，給編輯又寫郵件了，沒回復(fù)
 10+3
|
wangf9518 2026-03-17 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 材料學(xué)碩318求調(diào)劑 +5 | February_Feb 2026-03-19 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 一志愿中國海洋大學(xué)，生物學(xué)，301分，求調(diào)劑 +5 | 1孫悟空 2026-03-17 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 085600材料與化工求調(diào)劑 +6 | 緒幸與子 2026-03-17 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 0854可跨調(diào)劑，一作一項(xiàng)核心論文五項(xiàng)專利，省、國級證書40+數(shù)一英一287 +8 | 小李0854 2026-03-16 | 8/400 |
|