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七小艾新蟲 (小有名氣)
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[求助]
葡萄糖脫氫酶催化葡萄糖反應(yīng)產(chǎn)物是什么？？ 已有2人參與
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如題，各位大神，求教葡萄糖脫氫酶（NADP+依賴型）催化葡萄糖反應(yīng)產(chǎn)物是什么？文獻(xiàn)和導(dǎo)師都說(shuō)是葡萄糖酸，可是為嘛我做出來(lái)不是的。。。 我是用自己純化的純酶做的反應(yīng)。 由于葡萄糖酸標(biāo)準(zhǔn)品不好買，所以買了葡萄糖酸鈉的標(biāo)準(zhǔn)品，再將反應(yīng)液用NaOH處理后做液相檢測(cè)。 1、反應(yīng)液的出峰時(shí)間和葡萄糖酸鈉標(biāo)準(zhǔn)品出峰時(shí)間不一樣。 2、而且在底物（葡萄糖）濃度低于葡萄糖酸鈉標(biāo)準(zhǔn)品的情況下，反應(yīng)液的液相峰面積卻比葡萄糖酸鈉標(biāo)準(zhǔn)品大得多。 有文獻(xiàn)說(shuō)葡萄糖酸會(huì)被葡萄糖酸脫氫酶進(jìn)一步氧化，可是就算我的酶沒(méi)有純好，這個(gè)葡萄糖酸脫氫酶反應(yīng)也是要輔酶參與的呀，而且不可能所有的葡萄糖酸都反應(yīng)掉了牙。在下百思不得其解，求各位大神幫幫忙啊，再做不出來(lái)就要換課題了  |
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3樓2014-05-11 18:38:47
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4樓2014-05-12 14:59:35
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5樓2014-05-21 12:44:23
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謝啦~~我試過(guò)與反應(yīng)體系初始的NADP濃度相同的NADP溶液去做液相檢測(cè)，響應(yīng)值很小，也試過(guò)NADP與標(biāo)準(zhǔn)品混合做液相檢測(cè)，NADP不影響標(biāo)準(zhǔn)品出峰。 1、不過(guò)奇怪的是樣品放久了，之前檢測(cè)到的產(chǎn)物峰幾乎沒(méi)有了。 2、更奇怪的是我用細(xì)胞破碎液再做反應(yīng)，液相結(jié)果顯示產(chǎn)物是葡萄糖酸鈉。唯一的區(qū)別是之前的反應(yīng)過(guò)程中沒(méi)有控制pH,直接用高溫滅酶，而這次的反應(yīng)過(guò)程是一直控制pH在7.0。 不知是否有可能是葡萄糖酸在高溫（70℃，20min）條件下會(huì)進(jìn)一步反應(yīng)，而葡萄糖酸鈉比較穩(wěn)定？ |
6樓2014-05-21 20:11:48
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