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七小艾新蟲(chóng) (小有名氣)
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[求助]
葡萄糖脫氫酶催化葡萄糖反應(yīng)產(chǎn)物是什么?? 已有2人參與
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如題,各位大神,求教葡萄糖脫氫酶(NADP+依賴型)催化葡萄糖反應(yīng)產(chǎn)物是什么?文獻(xiàn)和導(dǎo)師都說(shuō)是葡萄糖酸,可是為嘛我做出來(lái)不是的。。。 我是用自己純化的純酶做的反應(yīng)。 由于葡萄糖酸標(biāo)準(zhǔn)品不好買(mǎi),所以買(mǎi)了葡萄糖酸鈉的標(biāo)準(zhǔn)品,再將反應(yīng)液用NaOH處理后做液相檢測(cè)。 1、反應(yīng)液的出峰時(shí)間和葡萄糖酸鈉標(biāo)準(zhǔn)品出峰時(shí)間不一樣。 2、而且在底物(葡萄糖)濃度低于葡萄糖酸鈉標(biāo)準(zhǔn)品的情況下,反應(yīng)液的液相峰面積卻比葡萄糖酸鈉標(biāo)準(zhǔn)品大得多。 有文獻(xiàn)說(shuō)葡萄糖酸會(huì)被葡萄糖酸脫氫酶進(jìn)一步氧化,可是就算我的酶沒(méi)有純好,這個(gè)葡萄糖酸脫氫酶反應(yīng)也是要輔酶參與的呀,而且不可能所有的葡萄糖酸都反應(yīng)掉了牙。在下百思不得其解,求各位大神幫幫忙啊,再做不出來(lái)就要換課題了 |
新蟲(chóng) (小有名氣)
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謝啦~~我試過(guò)與反應(yīng)體系初始的NADP濃度相同的NADP溶液去做液相檢測(cè),響應(yīng)值很小,也試過(guò)NADP與標(biāo)準(zhǔn)品混合做液相檢測(cè),NADP不影響標(biāo)準(zhǔn)品出峰。 1、不過(guò)奇怪的是樣品放久了,之前檢測(cè)到的產(chǎn)物峰幾乎沒(méi)有了。 2、更奇怪的是我用細(xì)胞破碎液再做反應(yīng),液相結(jié)果顯示產(chǎn)物是葡萄糖酸鈉。唯一的區(qū)別是之前的反應(yīng)過(guò)程中沒(méi)有控制pH,直接用高溫滅酶,而這次的反應(yīng)過(guò)程是一直控制pH在7.0。 不知是否有可能是葡萄糖酸在高溫(70℃,20min)條件下會(huì)進(jìn)一步反應(yīng),而葡萄糖酸鈉比較穩(wěn)定? |
金蟲(chóng) (小有名氣)
鐵蟲(chóng) (初入文壇)

新蟲(chóng) (小有名氣)
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