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[交流]
Primer5里面的false priming令人困惑不已 已有5人參與
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用Primer5設(shè)計(jì)上下游引物的時候,感覺下游引物不太合適就編輯了一下,哪知編輯過后,false priming欄目里就出現(xiàn)了一個Most stable dimer,可我仔細(xì)瞅了瞅,這個dimer不就是下游引物和我的模板鏈結(jié)合在一起的嗎,這怎么算是false呢?而且顯示其Delta G是-44kcal/mol,我個人感覺Primer5對該引物false priming的判斷是錯誤的,大家覺得呢? 另外,打開“All”后,還發(fā)現(xiàn)了另一個false priming dimer,也就是我編輯過后的引物和模板鏈其他部位的堿基對應(yīng)堿基相連接起來了,我就不明白了,我只是把之前的那個下游引物的5’端和3’端各刪了一個堿基,難道在我沒刪那兩堿基之前,原本的那個下游引物就不能和模板鏈的相關(guān)部位的堿基連接起來嗎? 感覺Primer5有許多地方讓我困惑,之前用其設(shè)計(jì)了一對引物,他們的cross dimer的Delta G是-5.4kcal/mol,而用oligo7檢測了后,mixed oligos的Delta G是-2.5kcal/mol,而且兩個軟件所生成的the most stable dimer的形式都不一樣。 軟件一只是用來預(yù)測的,其正確性一定不是100%,但是Primer5的false priming一欄讓我太過困惑,還希望戰(zhàn)友們不吝賜教,相互交流,不斷進(jìn)步! 謝過! |
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