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小橋流水06金蟲 (小有名氣)
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[求助]
做高效液相色譜要注意哪些 已有4人參與
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做了快一個月的液相了,不知道為啥同一個樣品進兩次樣有時峰面積差別好大,,做標準曲線時也是 今天偶爾和另一做標準曲線的同學交流,她說流動相每次最少要超聲15min,標樣也要過膜,我表示每次超聲幾分鐘就拎起來了,標樣更沒過膜 瞬間崩潰呀,做了這么久液相,白搭了?? ~~~~(>_< ~~~~ 各位前輩液相經(jīng)驗豐富的有啥經(jīng)驗提點提點啊,跪求 |
新蟲 (初入文壇)
新蟲 (小有名氣)
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樣品肯定要過膜,這是為了防止堵塞色譜柱,另外流動相超生是為了出去流動相里面的空氣,如果是現(xiàn)在比較新的液相色譜的話,應該不用超生就可以的,但是如果是以前比較舊的液相色譜建議還是超生15到20分鐘吧,你沒有超生那么長時間應該問題也不大。同一個樣品進兩次峰面積不同有可能是樣品是不是放置了一段時間,試著看一下平行樣的峰面積怎么樣;還有就是是不是時間太短了,有部分樣品沒有完全走出來,建議兩個樣品之間走一個空針試一下;最后還有可能就是儀器的問題了,因為我們老師強調(diào)最后懷疑儀器 [ 發(fā)自手機版 http://www.gaoyang168.com/3g ] |
新蟲 (初入文壇)
鐵桿木蟲 (著名寫手)
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關于流動相超聲,主要目的是為了脫氣,所以如果你的系統(tǒng)里沒有氣泡,這個問題排除。 關于樣品過膜,主要目的是為了保護進樣口和色譜柱,以免不溶顆粒損傷機器。但基本上這個對你出峰面積沒有影響。 如果你的問題主要集中在同一樣品出現(xiàn)很大差別的峰面積的情況,你可以考慮以下幾點: 1 如果是手動進樣,那樣確保自己的進樣手法穩(wěn)定;如果是機器進樣,那么要排查一下系統(tǒng)進樣器是否有故障。 2 另一種可能是你的峰型不完美,或雜峰太多,導致機器自動積分有誤差。比如基線可能不平,有時候自動積分的時候把別的小峰也算進去了。 3 也可能是流動相并不能完全將樣品峰洗脫下來,導致有時候出的多有時候出的少,結(jié)果不穩(wěn)定。 暫時想到這些可能,你可以一一排查。 |

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