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happyer0銅蟲(chóng) (小有名氣)
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[求助]
請(qǐng)問(wèn)如何用熒光顯微鏡觀察甲烷菌？ 已有1人參與
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看文獻(xiàn)說(shuō)甲烷菌內(nèi)有輔酶F420，在420nm波長(zhǎng)的入射光激發(fā)下發(fā)射出470nm波長(zhǎng)的熒光， 是不是要在紫外濾光片下才能直接觀察到發(fā)熒光的甲烷菌？是活菌才有熒光嗎？用另兩片（紅色和黃色）能不能看到？能不能拿厭氧發(fā)酵液直接在熒光下觀察？ 另外再請(qǐng)問(wèn)熒光顯微鏡三個(gè)濾光片，是根據(jù)什么情況選用？在環(huán)境微生物實(shí)驗(yàn)中一般哪兩個(gè)濾光片用得較多？ |
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【答案】應(yīng)助回帖
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xuweimbf: 金幣+1, 積極應(yīng)助 2014-05-22 17:19:13
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您的實(shí)驗(yàn)?zāi)康氖鞘裁矗渴且醇淄榫乃阑钋闆r還是其他的目的？ 濾片的目的是選擇一定范圍的波長(zhǎng)，然后咱們?nèi)搜劭梢杂^測(cè)得到。 關(guān)于濾片的選擇和用途建議你看看熒光顯微鏡的產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)就可以，上面有介紹。 如果是Live/dead staining 的話，需要加 染劑，然后觀測(cè)。 甲烷菌我沒(méi)有做過(guò)，我只做過(guò) Nitrifying bacterial staining.  |
2樓2014-05-22 12:33:02
happyer0
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謝謝您的回復(fù)。我是想看看厭氧培養(yǎng)液里面到底有沒(méi)有甲烷菌。因?yàn)榕囵B(yǎng)很久了，也看到液體里有氣泡出現(xiàn)，但是似乎沒(méi)有多少的產(chǎn)氣量。 實(shí)驗(yàn)室里用的是尼康熒光顯微鏡，我對(duì)熒光這濾光片作用不太了解，因?yàn)榭次墨I(xiàn)上說(shuō)的是輔酶F420，在420nm波長(zhǎng)的入射光激發(fā)下發(fā)射出470nm波長(zhǎng)的熒光，而一個(gè)濾光片是在450-490nm的，而紫外濾光片應(yīng)該在450nm以下，可是我們剛好缺這紫外的，所以我不知道是要在哪一個(gè)波段下觀察甲烷菌才好，因此才有上述問(wèn)題。 |
3樓2014-05-22 12:45:32
劉兵
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1.產(chǎn)甲烷菌的種類眾多，因基質(zhì)和反應(yīng)條件不同也會(huì)呈現(xiàn)出不同的種類分布，外形規(guī)則也有 不規(guī)則球星 桿狀 短桿狀 鏈球狀等等。目前常用的檢測(cè)方法應(yīng)該是 PCR-DGGE。 2.液體氣泡產(chǎn)生不一定就是甲烷，也可能是CO2。 如果可能的話 何不用氣相色譜先走個(gè)樣看看是否有甲烷氣體存在，然后再做下一步計(jì)劃。畢竟顯微鏡的誤差比較大。 3.在甲烷菌分子生物學(xué)中，日本東北大學(xué)的李玉友老師做的不錯(cuò)，您可以看看他實(shí)驗(yàn)室的文章。 |
4樓2014-05-22 14:54:58
happyer0
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5樓2014-05-22 16:12:27
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vaughn: 金幣+2, 以學(xué)術(shù)交流的思想來(lái)發(fā)帖，并給出別人的回復(fù)，非常好 2014-05-25 07:08:37
vaughn: 金幣+2, 以學(xué)術(shù)交流的思想來(lái)發(fā)帖，并給出別人的回復(fù)，非常好 2014-05-25 07:08:37
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因?yàn)橹苯鉀Q這個(gè)問(wèn)題，在微生物版塊上先發(fā)了求助帖，收到 liujianmin68的 回復(fù)：1. 甲烷菌是有輔酶F420，且能用熒光顯微鏡觀察到熒光。420nm下有熒光激發(fā)出，所以應(yīng)該選擇紫外濾光片觀察，你描述的沒(méi)錯(cuò)。 2. 是活菌才能觀察，并且因?yàn)榧淄榫菄?yán)格厭氧菌，所以觀察過(guò)程盡可能快些，活的甲烷菌能發(fā)熒光，但在觀察過(guò)程中，能看到熒光強(qiáng)度一直在減弱。所以，想取得較好的觀察效果，最好在幾分鐘內(nèi)完成。 3. 可以取發(fā)酵液直接觀察，甲烷菌較小，單個(gè)菌的熒光較弱，所以，我們觀察時(shí)，一般用40倍物鏡，觀察群體的熒光。 4. 其它的濾光片顏色激發(fā)波長(zhǎng)有直接的關(guān)系，在細(xì)胞生物學(xué)研究中，有紅色、綠色、黃色等不同的熒光標(biāo)記，這時(shí)候就可以用不同的熒光濾片了。 考慮到可能有些人也不明白，所以將以上回答貼于此。 |
6樓2014-05-23 11:27:39
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