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happyer0銅蟲 (小有名氣)
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[求助]
請問如何用熒光顯微鏡觀察甲烷菌？ 已有1人參與
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看文獻說甲烷菌內(nèi)有輔酶F420，在420nm波長的入射光激發(fā)下發(fā)射出470nm波長的熒光， 是不是要在紫外濾光片下才能直接觀察到發(fā)熒光的甲烷菌？是活菌才有熒光嗎？用另兩片（紅色和黃色）能不能看到？能不能拿厭氧發(fā)酵液直接在熒光下觀察？ 另外再請問熒光顯微鏡三個濾光片，是根據(jù)什么情況選用？在環(huán)境微生物實驗中一般哪兩個濾光片用得較多？ |
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【答案】應(yīng)助回帖
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happyer0: 金幣+1, ★有幫助 2014-05-22 12:38:29
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您的實驗?zāi)康氖鞘裁�？是要看甲烷菌的死活情況還是其他的目的？ 濾片的目的是選擇一定范圍的波長，然后咱們?nèi)搜劭梢杂^測得到。 關(guān)于濾片的選擇和用途建議你看看熒光顯微鏡的產(chǎn)品說明書就可以，上面有介紹。 如果是Live/dead staining 的話，需要加 染劑，然后觀測。 甲烷菌我沒有做過，我只做過 Nitrifying bacterial staining.  |
2樓2014-05-22 12:33:02
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3樓2014-05-22 12:45:32
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4樓2014-05-22 14:54:58
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5樓2014-05-22 16:12:27
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vaughn: 金幣+2, 以學(xué)術(shù)交流的思想來發(fā)帖，并給出別人的回復(fù)，非常好 2014-05-25 07:08:37
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因為著急解決這個問題，在微生物版塊上先發(fā)了求助帖，收到 liujianmin68的 回復(fù)：1. 甲烷菌是有輔酶F420，且能用熒光顯微鏡觀察到熒光。420nm下有熒光激發(fā)出，所以應(yīng)該選擇紫外濾光片觀察，你描述的沒錯。 2. 是活菌才能觀察，并且因為甲烷菌是嚴格厭氧菌，所以觀察過程盡可能快些，活的甲烷菌能發(fā)熒光，但在觀察過程中，能看到熒光強度一直在減弱。所以，想取得較好的觀察效果，最好在幾分鐘內(nèi)完成。 3. 可以取發(fā)酵液直接觀察，甲烷菌較小，單個菌的熒光較弱，所以，我們觀察時，一般用40倍物鏡，觀察群體的熒光。 4. 其它的濾光片顏色激發(fā)波長有直接的關(guān)系，在細胞生物學(xué)研究中，有紅色、綠色、黃色等不同的熒光標記，這時候就可以用不同的熒光濾片了。 考慮到可能有些人也不明白，所以將以上回答貼于此。 |
6樓2014-05-23 11:27:39
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