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小木蟲論壇-學術科研互動平臺 » 生物醫(yī)藥區(qū) » 分子生物 » 生物化學 » 基因在不同載體表達情況不同
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基因在不同載體表達情況不同 已有1人參與
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| 請問我的基因有的在pET-32a中表達，有的在PGEX-4T-1中表達，這是為什么呢？與什么有關��？能說的詳細點嗎？求知道�。。。� |
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liuderong
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【答案】應助回帖
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感謝參與，應助指數(shù) +1
小蟲子MM(西門吹雪170代發(fā)): 金幣+10, 鼓勵熱心回帖交流 2014-05-26 12:38:48
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小蟲子MM(西門吹雪170代發(fā)): 金幣+10, 鼓勵熱心回帖交流 2014-05-26 12:38:48
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通常情況下，沒有哪一項規(guī)定說某個蛋白只能用什么樣的載體來表達，選擇什么樣的載體一般考慮以下幾個方面的內容。 1.首先是這個載體是否可以用。不少載體是通過酶切連接來構建的，某些基因因為酶切位點不合適，可能上不了載體，這樣這個載體就不能用了。商業(yè)化的載體一般都會有足夠的酶切位點，大部分基因都可以上。還有就是載體上的啟動子之類的原件，某些啟動子是在真核生物才有用的，有些則適用于原核生物，要根據(jù)實驗的目的來確定載體是否能用。 2.其次是考慮實驗室的習慣。比如我以前的實驗室就比較喜歡pET系列的載體，師兄師姐積累的經(jīng)驗比較成熟，用起來出什么問題了很容易解決，相關的試劑如內切酶等儲備也很足。要是引入一個新的載體，實驗室要安排專門的人來驗證，很麻煩的。如你提問的問題，我在設計引物的時候，如果同時有pET-32a和PGEX-4T-1兩個載體，我一般會找兩個相同的酶切位點，設計能同時上兩個載體的引物，最后寫文章的時候我只寫一個，是因為另外一個效果沒有這么好。 3.如果找實驗室的習慣做不出來的話，就再考慮根據(jù)文獻更改載體。 |
2樓2014-05-26 11:20:19
3樓2014-05-26 13:50:57
liuderong
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4樓2014-05-26 18:32:24
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5樓2015-08-19 15:50:22
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