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[交流]
細(xì)胞凍存有遇到過這些問題嗎？
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很多珍貴的細(xì)胞株，凍存后很難復(fù)蘇，或者復(fù)蘇后出現(xiàn)大量死亡，不知大家都是怎么處理的，是否解決了這些問題？ 我先說說我最近遇到的問題吧。 培養(yǎng)物：雜交瘤細(xì)胞 凍存液：90%FBS+10%DMSO 凍存過程：(泡沫盒) -70℃過夜→轉(zhuǎn)液氮保存 復(fù)蘇過程：40℃水浴→90s內(nèi)，溶解→1500 rpm，3 min→棄上清，培養(yǎng)基重懸→T75培養(yǎng)瓶培養(yǎng)，5% CO2,37℃，DMEM+20%FBS+雙抗 問題：部分細(xì)胞復(fù)蘇之后，大量死亡，有的甚至全部死亡；此類細(xì)胞中，部分細(xì)胞復(fù)蘇起來后死的就很多，部分細(xì)胞過幾個(gè)小時(shí)后死亡 作出的努力：1、在添加飼養(yǎng)細(xì)胞的24孔板內(nèi)復(fù)蘇，能搶救一部分，但耗時(shí) 2、凍存數(shù)目增加，占的位置太多，且仍然不能解決 3、試過不同的凍存液配方，F(xiàn)BS20%、50%、90%都沒有明顯的改善 最近一次發(fā)現(xiàn)，-70保存后復(fù)蘇比液氮保存后復(fù)蘇的效果要好很多，這說明我在轉(zhuǎn)液氮的時(shí)候出問題了么？可是不是很明白會(huì)出啥問題呢~~ 請(qǐng)大家都來說一說哈！ |
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ankang0910
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小木蟲: 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
隨游: 金幣+2, 哦，謝謝。我一般是復(fù)蘇到小一號(hào)的培養(yǎng)器皿里面，就是覺著放到孔里很耗時(shí)啊 2014-05-28 19:06:34
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隨游: 金幣+2, 哦，謝謝。我一般是復(fù)蘇到小一號(hào)的培養(yǎng)器皿里面，就是覺著放到孔里很耗時(shí)啊 2014-05-28 19:06:34
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凍存：凍存液要使用90%FBS+10%DMSO的配方，最好使用凍存盒，凍細(xì)胞之前每管細(xì)胞量多一些。 復(fù)蘇：你的操作應(yīng)該沒問題，但是建議先復(fù)蘇到小細(xì)胞瓶中，或24孔板的2-3個(gè)孔中，T75太大了，瘤細(xì)胞相互挨著才能長得好。如果死的太多還是長不起來的話，建議用96孔板培養(yǎng)，這樣每孔細(xì)胞數(shù)相對(duì)較多，營養(yǎng)集中，更容易存活。 希望對(duì)你有幫助，祝實(shí)驗(yàn)順利！  |
40樓2014-05-28 16:52:11
chentao
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2樓2014-05-28 15:52:04
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3樓2014-05-28 15:53:00
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4樓2014-05-28 15:59:32
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5樓2014-05-28 16:00:28
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9樓2014-05-28 16:07:31
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10樓2014-05-28 16:08:17
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