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藍(lán)默兒金蟲 (小有名氣)
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[求助]
兩種單抗夾心ELISA方法的建立
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| 用一株單抗進(jìn)行包被，用另一株酶標(biāo)單抗進(jìn)行檢測(cè)，抗原為純化好的原核表達(dá)蛋白，同時(shí)設(shè)陰性對(duì)照和空白對(duì)照，結(jié)果陰性對(duì)照和空白值很高可達(dá)到1.5。為什么會(huì)出現(xiàn)這種情況，難道酶標(biāo)單抗與另一株單抗反應(yīng)了，好郁悶，求幫助。。。 |
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【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
藍(lán)默兒: 金幣+4 2014-06-05 09:10:11
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
藍(lán)默兒: 金幣+4 2014-06-05 09:10:11
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陰性對(duì)照和空白值都很高，請(qǐng)問你的空白值是怎么設(shè)置的？只加顯色液？還是第一步?jīng)]加陰陽性對(duì)照，第二步加了酶標(biāo)抗體？ 可能的原因有： 1、你說的，酶標(biāo)抗體和包被抗體有反應(yīng)； 2、包被抗體后，沒有進(jìn)行封閉，導(dǎo)致酶標(biāo)抗體吸附在微孔板上； 3、包被抗體后，進(jìn)行封閉，封閉液的某些組分可以跟酶標(biāo)抗體反應(yīng)； 4、加入酶標(biāo)抗體反應(yīng)后，清洗不干凈，導(dǎo)致酶標(biāo)抗體殘留在微孔板上。 最后，還是具體介紹一下你的實(shí)驗(yàn)步驟，實(shí)驗(yàn)條件，這樣大家才好給你分析是哪里出問題了！ |
2樓2014-06-04 23:57:53
藍(lán)默兒
金蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 1281.8
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- 蟲號(hào): 1695664
- 注冊(cè): 2012-03-16
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- 專業(yè): 獸醫(yī)傳染病學(xué)
送紅花一朵 |
真心謝謝您的幫助，我的具體步驟是： 1.包被：將三種單抗混合，1：1000，1:2000,1:4000......1:128000稀釋，做三個(gè)平行，4°過夜。 2.第二天洗滌4次，每次3min，拍干。5%脫脂乳封閉，37°，2h。 3.洗滌4次，每次3min，拍干。加抗原（為純化好的原核表達(dá)蛋白）稀釋濃度為2微克/ml，同時(shí)設(shè)陰性對(duì)照（胎牛血清1：100稀釋），空白對(duì)照（PBS溶液)。37°，1h。 4.洗滌4次，每次3min，拍干。加酶標(biāo)抗體（1:1000稀釋），37°，1h。 5.洗滌4次，每次3min，拍干。加TMB顯色，每孔100微升。37°，10min。 6.2M硫酸終止， 7.OD450讀數(shù)。 |
3樓2014-06-05 09:09:47
4樓2014-06-05 09:58:50
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