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藍默兒金蟲 (小有名氣)
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[求助]
夾心ELISA幾種包被液嘗試出現(xiàn)的問題 已有3人參與
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本人做雙抗夾心ELISA：（酶標(biāo)單抗自己標(biāo)記，驗證效價也比較高） 嘗試過用辛酸-硫酸銨純化多抗（小鼠血清）包被，酶標(biāo)單抗作為檢測抗體，但陰性，空白值比較高， 2.用三種未處理過的單抗腹水混合，包被，酶標(biāo)單抗作為檢測抗體，但陰性，空白值也比較高， 3.用辛酸-硫酸銨純化一株單抗包被，酶標(biāo)單抗作為檢測抗體，但陰性，空白值比較高，陽性/陰性=2 分析：可能是自己的蛋白比較特殊，我的蛋白為炎性應(yīng)激蛋白，考慮在制備多抗和腹水都是對小鼠的一種刺激，導(dǎo)致在血液及體液中此種蛋白會升高，刺激越強烈，血液及體液中此種蛋白越高。 后改后雜交瘤細胞上清包被，酶標(biāo)單抗作為檢測抗體，值是陽性=1.0，陰性=0.5，但還是很高，為什么會出現(xiàn)這中問題，雜交瘤細胞上清應(yīng)該只用抗體，沒有炎性蛋白了吧，值還是很高. 注：本人的包被做梯度稀釋了，封閉液也嘗試：脫脂乳，BSA，明膠。顯色液也換了2種。都沒有多大改觀。  |
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panda73
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2樓2014-06-21 20:46:58
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3樓2014-06-22 10:22:22
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5樓2015-03-13 16:36:49
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