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藍默兒金蟲 (小有名氣)
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夾心ELISA幾種包被液嘗試出現(xiàn)的問題 已有3人參與
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本人做雙抗夾心ELISA:(酶標單抗自己標記,驗證效價也比較高) 嘗試過用辛酸-硫酸銨純化多抗(小鼠血清)包被,酶標單抗作為檢測抗體,但陰性,空白值比較高, 2.用三種未處理過的單抗腹水混合,包被,酶標單抗作為檢測抗體,但陰性,空白值也比較高, 3.用辛酸-硫酸銨純化一株單抗包被,酶標單抗作為檢測抗體,但陰性,空白值比較高,陽性/陰性=2 分析:可能是自己的蛋白比較特殊,我的蛋白為炎性應激蛋白,考慮在制備多抗和腹水都是對小鼠的一種刺激,導致在血液及體液中此種蛋白會升高,刺激越強烈,血液及體液中此種蛋白越高。 后改后雜交瘤細胞上清包被,酶標單抗作為檢測抗體,值是陽性=1.0,陰性=0.5,但還是很高,為什么會出現(xiàn)這中問題,雜交瘤細胞上清應該只用抗體,沒有炎性蛋白了吧,值還是很高. 注:本人的包被做梯度稀釋了,封閉液也嘗試:脫脂乳,BSA,明膠。顯色液也換了2種。都沒有多大改觀。 |

金蟲 (小有名氣)

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