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hbl215金蟲 (文壇精英)
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關于噬菌體展示技術的一些問題 已有4人參與
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最近在學習基因重組跟噬菌體展示技術這一塊，完全小白一枚，再看文獻中有幾個問題想請教： 1.從雜交瘤細胞中提取總RNA反轉錄成CDNA，再設計帶有poly-C尾巴的anchor引物作為5’端引物擴增抗體的可變區(qū)，這里的5’端引物是不是僅靠這些G-C配對就可以延伸呢，如果是的話至少需要多少堿基配對就可以保證延伸？ 2.3’端的基因特異性引物是以FR4為模板設計的么，還是其他的設計方案？或者3’端引物以恒定區(qū)序列為模板設計，先擴增出整個重輕鏈基因，再通過基因序列比對，除去一樣的恒定區(qū)序列，剩下的就是可變區(qū)序列？ 3.在噬菌體庫的富集篩選中，為什么富集到最后一輪，庫容量越來越大呢？我的理解是篩去原始庫中的一些不結合的噬菌體后，庫應該越來越小呀，最后濃縮出高結合力的精華呀。 希望做過的懂得的幫我解釋一下，小白不勝感激！ |
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hbl215
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9樓2014-06-27 09:42:09
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6樓2014-06-26 09:29:58
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