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枯草芽孢桿菌表達(dá)人源蛋白的問題
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| 小妹最近在做枯草芽孢桿菌表達(dá)人來源的重組蛋白,發(fā)現(xiàn)很多蛋白都不表達(dá),或者表達(dá)的非常不好。WESTERN可以檢測,SDS-PAGE看不到。而芽孢自身來源的重組蛋白表達(dá)卻不錯。但是我的最終目的就是用來表達(dá)人源蛋白的。請問做重組蛋白表達(dá)的話,枯草芽孢桿菌適合表達(dá)什么蛋白呢? |
金蟲 (正式寫手)
銅蟲 (小有名氣)
| 是這樣的,首先選擇菌株很重要,WB800敲除了多個蛋白酶,可能對你更加合適。其次,你要選擇合適的信號肽來分泌你的蛋白,wb可以檢測,說明已經(jīng)分泌了,你可以看看有沒有活性。SDS page的靈敏度肯定沒有WB高啊,這個·很正常,一般都要濃縮的,工業(yè)上也要高密度發(fā)酵的啊,接著分泌水平基本上有10-50倍的提高,所以不用擔(dān)心。自身來源的蛋白不錯,有多不錯?g/l?你自己做的數(shù)據(jù)是?枯草芽孢桿菌表達(dá)大宗酶類,如淀粉酶效果不錯,可以有25-30g/l |
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